检索历史 清除

目的 探讨microRNA-363-5p(miR-363-5p)靶向血小板反应蛋白-3(THBS3)对心肌肥大的调节作用.方法 体外人心肌细胞(AC16)经血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)处理复制心肌肥大体外模型,随后鬼笔环肽染色观察细胞骨架,Western blotting检测心肌肥大体外模型中胚胎期基因的蛋白表达,以确认模型复制的有效性.实时荧光定量聚合酶链反应检测心肌肥大体外模型中miR-363-5p表达.Western blotting检测肥大心肌细胞中转染miR-363-5p mimics和miR-363-5p inhibitor后,肥大相关表型的变化.双荧光素酶报告基因实验验证miR-363-5p与THBS3的3'-UTR结合作用.设计挽救实验,同时过表达THBS3与miR-363-5p,以评估THBS3是否介导miR-363-5p对心肌肥大的调控.结果 AngⅡ组细胞面积较对照组大(P＜0.05),心房钠尿肽(ANP)、B型钠尿肽(BNP)、肌球蛋白β重链(β-MHC)及miR-363-5p较对照组高(P＜0.05).miR-363-5p mimics组miR-363-5p相对表达量较mimics-NC 组高(P＜0.05),miR-363-5p inhibitor组相对表达量较inhibitor-NC 组低(P＜0.05);miR-363-5p mimics组 ANP、BNP、β-MHC相对表达量较mimics-NC 组低(P＜0.05),miR-363-5p inhibitor组相对表达量较inhibitor-NC组高(P＜0.05).miR-363-5p mimics组细胞面积较mimics-NC组小(P＜0.05),miR-363-5p inhibitor组较inhibitor-NC 组大(P＜0.05).miR-363-5p mimics+THBS3-WT 组 THBS3-WT 荧光素酶活性较mimics-NC+THBS3-WT 组低.mimics-NC+THBS3-MUT组与miR-363-5p mimics+THBS3-MUT组THBS3-MUT荧光素酶活性比较,差异无统计学意义(P＞0.05).miR-363-5p mimics组THBS3 mRNA和蛋白相对表达量较mimics-NC组低(P＜0.05).THBS3-OE组THBS3 mRNA和蛋白相对表达量较对照组、OE-NC组高(P＜0.05).THBS3-OE+miR-363-5p mimics组细胞面积较OE-NC+miR-363-5p mimics组大(P＜0.05).THBS3-OE+miR-363-5p mimics组ANP、BNP及β-MHC相对表达量较OE-NC+miR-363-5p mimics组高(P＜0.05).结论 过表达miR-363-5p可抑制AngⅡ对AC16细胞的促肥大作用,其机制与减少THBS3表达有关.