目的探讨免疫性血小板输注无效(PTR)患者HLA/HPA抗体特异性分布特征及其对血小板输注效果的影响.方法 本研究以86例免疫性PTR患者为研究对象,收集其性别、年龄、身高、体重、配血次数、疾病类型、输注前后血小板计数等临床资料,通过微珠法进行HLA特异性抗体的检测,并分析抗体特性对血小板输注效果的影响.结果86例PTR患者中,单独HLA抗体、单独HPA抗体、HLA+HPA抗体阳性的患者分别为72例(83.72％)、8例(9.30％)、6例(6.98％).HLA抗体在各位点中检出频率最高的抗体对应等位基因分别为A*25:01、B*15:12、C*02:02(和C*17:01),检出率分别为81.48％、87.04％、48.15％;而对应抗原表位出现频率最高的前三位为163LG、97V、71ATD,检出率分别为87.04％、77.78％、74.07％.仅存在HLA抗体的患者,输注交叉配型相合血小板的24 h血小板计数纠正增加指数(CCI)及输注有效情况均明显优于随机血小板(P＜0.01).在血小板交叉配型阴性结果的患者中,HLA抗体强度与交叉配型相合血小板的24 h CCI值及输注有效情况呈负相关关系,强度越高,输注效果越差(P＜0.01).HLA抗体强度为中、低等水平的患者,输注交叉配型相合血小板的24 h CCI值及输注有效情况均优于输注随机血小板(P＜0.05).结论 本研究所得到的PTR患者HLA/HPA抗体特性及其对血小板输注效果影响的结果,可为血小板库建立时供者的选择提供指导,同时对临床PTR患者的治疗方式选择有一定的参考价值.

目的:探究硫氧还蛋白(TXN)在胰腺癌中的表达及对胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响.方法:通过收集泛癌和TCGA胰腺癌转录组和临床数据,分析TXN家族基因的表达水平.通过荧光定量PCR(RT-qPCR)技术、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TXN在癌组织与癌旁组织中及不同细胞系的表达水平.通过使用小干扰RNA(siRNA)抑制胰腺癌Panc-1、BxPC-3细胞中TXN基因的表达,并与未抑制TXN基因表达的Panc-1、BxPC-3细胞进行对照实验,进而探究TXN对这2种细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响.使用转录组数据和生存结果资料,以TXN表达中位值分为两组,绘制TXN高低表达两组的生存曲线图.结果:在胰腺癌组织和细胞中,TXN的表达水平明显高于癌旁组织和正常细胞(P＜0.05).抑制胰腺癌细胞的TXN的表达水平后,低表达的TXN水平的胰腺癌细胞增殖率、侵袭细胞数量、愈合率低于对照组的胰腺癌细胞,其凋亡率较正常胰腺癌细胞明显升高(P＜0.05).TXN在胰腺癌患者肿瘤内表达水平越高,其生存时间越短(P＜0.05).结论:TXN能增强胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,并减弱细胞凋亡程度;胰腺癌组织中TXN表达量越高,预后越差.

目的:探究纤维粘连蛋白(FN)靶向JAK/STAT3信号通路调控粘连性肠梗阻的作用机制.方法:选取2019年1月-2020年12月就诊行肠切除手术的粘连性肠梗阻患者65例(观察组),同期行腹股沟疝手术患者65例(对照组),取患者肠组织及术前血液样本,采用qRT-PCR、Western blot及免疫组织化学实验检测肠组织样本中FN、STAT3、p-STAT3基因及蛋白表达,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清样本中FN表达.体外培养人肠上皮细胞系HIEC-6,采用慢病毒转染抑制细胞FN表达,采用CCK8、Transwell迁移实验观察FN对细胞增殖及分化的影响,同时采用qRT-PCR、Western Blot实验检测FN对细胞STAT3、p-STAT3表达的影响.结果:与对照组比较,观察组肠组织中FN mRNA及蛋白表达明显较高(P＜0.05),STAT3、p-STAT3 mRNA及蛋白表达则明显较低(P＜0.05),且观察组血清中分泌型FN含量也明显较高(P＜0.05).体外实验显示,与NC siRNA组HIEC-6细胞比较,LV-FN siRNA组HIEC-6细胞在48、72、96、120 h的增殖率均明显较低(P＜0.05),细胞迁移能力也明显较低(P＜0.05),其FN mRNA及蛋白表达明显较低(P＜0.05),STAT3、p-STAT3 mRNA及蛋白则明显较高(P＜0.05).结论:纤维粘连蛋白在粘连性肠梗阻患者肠组织及血清中呈明显高表达,可通过JAK/STAT3信号通路的异常激活影响细胞的增殖和迁移,引I起病变肠段发病.

目的:分析急性脑梗死(ACI)病人的SOCS3基因多态性,并探讨其与疾病进展的关系.方法:根据入院时美国国家卒中量表(NIHSS),将310例ACI病人分为轻度和中重度.根据入院后7 d的NIHSS评分将病人进一步分为进展组和非进展组.根据SOCS3基因rs8064821的测序结果,检测到CC、CA和AA三种基因型,分析各基因型的分布差异及其对疾病进展的预测价值.结果:ACI病人SOCS3基因rs8064821位点的基因型分布为CC(161例)、CA(127例)和AA(22例),频率分别为51.93％、40.97％和7.10％.中重度组病人的CC基因型比例低于轻度组,CA、AA基因型比例高于轻度组(P<0.01).与非进展组相比,进展为神经功能缺损的病人CC基因型比例较低,CA和AA基因型比例较高(P<0.01).结论:CA和AA基因型是皖北地区ACI病人SOCS3基因rs8064821位点的主要基因型,携带CA和AA基因型的病人更易出现神经功能障碍.

目的:探讨Ⅴ型胶原蛋白α2(COL5A2)在胃癌组织中表达情况及其对胃癌细胞BGC823表型影响,并研究其相关影响机制.方法:收集手术切除的胃癌组织及相应癌旁正常组织各18例,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blotting检测COL5A2表达差异.人胃癌细胞株BGC823转染siRNA,敲低COL5A2基因在细胞中表达量,通过qRT-PCR及Western blotting验证转染效率.通过克隆形成实验检测各组细胞增殖变化,Transwell检测细胞侵袭变化,Western blotting检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白MMP9、Wnt、β-catenin表达.结果:与癌旁正常组织相比,胃癌组织中COL5A2蛋白表达增高(P<0.05).沉默COL5A2表达后,BGC823细胞增殖及侵袭能力均降低(P<0.05),且MMP9、Wnt、β-catenin蛋白表达量均下调(P<0.05).结论:COL5A2蛋白表达在胃癌组织中表达上调,并且可能通过Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌细胞增殖及侵袭.

目的 通过对比PCR-SBT、NGS、TGS三种测序试剂在HLA-DPB1基因分型的结果,分析基于ONT平台的TGS测序技术在处理HLA-DPB1基因分型模棱两可情况时的效率、优势及原因.方法 采用PCR-SBT、NGS(Illumina平台)、TGS(ONT平台)三种测序试剂分别对48例样本进行HLA-DPB1检测分型.NGS测序和TGS测序以HLA-DPB1命名*后三个区域数字作为高分辨结果进行统计,SBT测序以HLA-DPB1命名*后二个区域数字作为高分辨结果进行统计.结果48例样本中,TGS没有出现模棱两可结果,全部为唯一结果,而PCR-SBT测序共有45个样本出现模棱两可结果,占比93％(45/48),NGS共有5个样本出现模棱两可结果,占比10％(5/48).结论 与NGS测序和PCR-SBT测序技术相比,TGS测序可以解决HLA-DPB1基因分型的绝大部分模棱两可情况,提高了测序效率和准确性.

目的 研究超声引导下细针穿刺标本中BRAF、RAS、TERT基因的表达特点及其在甲状腺结节术前诊断中的应用价值.方法 回顾性分析航空总manbet官网登录 甲状腺结节细针穿刺标本537例.每例标本的细胞涂片和液基细胞制片行巴氏染色,并依据Bethesda分级系统判读结果.穿刺组织采用实时荧光定量PCR分析基因突变情况.结果 Bethesda Ⅰ类结节65例(12.10％),Ⅱ类153例(28.49％),Ⅲ类84例(15.64％),Ⅳ类9例(1.68％),Ⅴ类73例(13.59％),Ⅵ类153例(28.49％).BRAF V600E突变220例(40.97％),NRAS突变21例(3.91％),KRAS突变6例(1.12％),HRAS突变2例(0.37％).其中BRAF V600E与KRAS共突变1例.BRAF V600E基因突变与患者细胞学诊断结果具有相关性(P<0.05);年龄较小者更易发生BRAF V600E突变(P<0.05);相较于女性患者,男性更易发生BRAF V600E突变(P<0.05);甲状腺左叶的结节更易发生KRAS突变(P<0.05).结论 在甲状腺细针穿刺标本中,BRAF V600E基因突变最常见,在RAS基因突变中NRAS突变居多.

目的 探讨玉屏风散对程序性死亡受体1(PD-1)-程序性死亡配体-1(PD-L1)结合及对肺癌细胞在体内外生长的影响.方法 MTT法检测玉屏风散提取物对小鼠Lewis肺癌LLC细胞生长的影响;乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测玉屏风散提取物对T细胞和LCC细胞共培养中靶细胞杀伤性作用;酶联免疫吸附(ELISA)实验检测玉屏风散提取物对PD-1和PD-L1结合的阻断作用,以及对γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)释放水平的影响;同基因肿瘤模型分析玉屏风散对肺癌LLC细胞体内生长的抑制作用;免疫组化染色考察玉屏风散对肿瘤组织内CD4+T细胞、CD8+T细胞浸润的影响.结果 玉屏风散呈剂量依赖性抑制LLC细胞的生长及内源性PD-L1蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01),竞争性阻断 PD-1 和 PD-L1 结合(P＜0.05,P＜0.01),促进 T 细胞 IFN-γ和 TNF-α 的释放(P＜0.05,P＜0.01),阻断PD-L1对T细胞功能性抑制作用(P＜0.05,P＜0.01).玉屏风散可以抑制LLC肿瘤生长(P＜0.01),增加CD4+T、CD8+T细胞的浸润数量(P＜0.01).结论 玉屏风散在体外细胞模型中可阻断PD-L1对T细胞功能的抑制作用,在同源小鼠肿瘤模型中具有抗肿瘤效果,可增强CD4+T细胞、CD8+T细胞对癌细胞的杀伤作用.

目的 分析单分子实时(SMRT)测序技术判断HLA基因型、单体型的准确性,以探讨该方法应用于临床的可行性.方法 留取19例需行肾移植的患者血液标本,提取DNA后利用SMRT测序技术检测样本基因序列,并利用PCR-SBT方法验证其准确性.结果SMRT技术可鉴定出19例样本的HLA基因型和基因单体型,且结果与PCR-SBT方法相符.1和14号样本PCR-SBT方法的C位点结果存在模棱两可现象,结果为HLA-C*03:02/04;03:03/132,SMRT技术可直接区分,结果为HLA-C*03:02:02,03:03:01.另外,SMRT方法在1号样本的B位点发现新的HLA等位基因.结论SMRT测序技术应用于HLA高分辨率分型具有高度准确性,在HLA单体型分析具有精准定位多个长间距突变位置的独特优势.

目的:探讨不同剂量率 60Co γ射线照射对辐射诱导的基因表达水平改变的影响。 方法:60Co γ射线照射3例正常人离体外周血，剂量率分别为0.2、1.0和2.0 Gy/min，照射剂量为0、1、2、4和6 Gy，照射后24 h收集细胞，实时荧光定量(PCR)法对11个基因(CDKN1A、MDM2、PCNA、FDXR、GADD45A、PHPT1、ASTN2、TNFSF4、POLH、GDF-15和PPM1D)mRNA表达水平进行相对定量检测；逐步回归法构建不同剂量率基因组合表达模型。 结果:不同剂量率0.2、1和2 Gy/min 60Co γ射线照射后，辐射诱导的11个基因的相对表达量随照射剂量增加而升高，具有显著的剂量依赖性( R2＝0.744～0.998， P< 0.05)；0.2 Gy/min 60Co γ射线照射2 Gy后，CDKN1A、FDXR、PHPT1和TNFSF4基因的表达量明显高于1和2 Gy/min剂量率组，差异具有统计学意义( t＝3.73、5.73、2.44、2.77、3.53、2.68、2.43、2.05， P< 0.05)；2 Gy/min 60Co γ射线照射6 Gy后，PPM1D基因表达量明显高于其他两个剂量率组( t＝3.82、2.54， P< 0.05)；不同剂量率基因组合表达模型由2～3个基因组成，回归方程的 R2值为0.951～0.976( P< 0.05)。 结论:在0.2～2 Gy/min剂量率范围内，不同剂量率 60Co γ射线照射可能会影响辐射诱导人外周血基因表达水平的改变。