目的:研究轮状病毒非结构蛋白4的86~175位氨基酸肽段(NSP4 86-175)对大鼠心肌细胞损伤作用及其相关机制。 方法:利用前期制备好的活性NSP4 86-175蛋白处理大鼠H9C2心肌细胞，观察处理后的细胞生长形态变化，检测细胞培养液中LDH活性；Fluo-3AM标记细胞内游离的钙离子，蛋白质处理细胞后，用激光共聚焦显微镜检测大鼠心肌细胞内钙离子浓度变化。流式细胞术分析蛋白质对细胞凋亡的影响，RT-PCR检测Bax、Bcl-2、caspase-3、78 kDa葡萄糖调控蛋白(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)及caspase-12 mRNA转录水平；Western blot检测caspase-3、caspase-8、caspase-9、GRP78、CHOP和caspase-12蛋白表达水平。 结果:正常生长的心肌细胞呈典型的成肌样细胞形态，细胞呈梭形，边界清晰。纯化的NSP4 86-175蛋白刺激后出现明显的细胞病变效应，细胞空泡变性，皱缩变圆，细胞碎裂；蛋白质处理组细胞培养液中的LDH活性均增高；与对照组相比，NSP4 86-175处理组细胞的钙离子荧光增强，细胞凋亡率增高，细胞凋亡因子caspase-3、caspase-8、caspase-9、Bax-2表达上调，内质网应激(ERS)经典标志分子GRP78、CHOP和caspase-12表达上调。 结论:NSP4 86-175对大鼠心肌细胞具有损伤作用，这可能与它导致细胞内钙超载，并引起内质网应激进而诱导心肌细胞凋亡坏死有关，为轮状病毒肠道外播散感染和致心肌损伤提供了一定的理论依据。

目的:评价毛蕊花苷对小鼠异位心脏移植冷缺血再灌注损伤的影响及其与NF-κB/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路的关系。方法:动物实验：SPF级健康雄性C57BL/6小鼠18只，6~8周龄，体质量24~28 g，采用随机数字表法分为3组( n＝6)：对照组(C组)、心脏移植冷缺血再灌注组(I/R组)和心脏移植冷缺血再灌注+毛蕊花苷组(I/R+VB组)。采用cuff套管法颈部异位心脏移植的方法制备小鼠心脏移植冷缺血再灌注损伤模型，C组供体心脏取下后立即移植至受体，I/R组供体心脏于4 ℃保存液保存8 h后移植至受体，I/R+VB组供体与受体小鼠分别于术前3 d时腹腔注射毛蕊花苷20 mg/kg。于再灌注24 h时进行移植物跳动评分后取移植心脏心肌组织，采用ELISA法检测MDA含量和SOD活性；取部分供体心肌组织，观察病理学结果；采用Western blot法检测NF-κB、p-NF-κB、NLRP3、ACS和caspase-1的表达；RT-PCR法检测IL-1β、TNF-α及IL-6 mRNA的表达。细胞实验：建立大鼠心肌细胞H9c2冷缺氧复氧模型，采用随机数字表法将细胞分为3组( n＝24)：对照组(C组)、冷缺氧复氧组(H/R组)、冷缺氧复氧+毛蕊花苷组(H/R+VB组)。采用10 ℃缺氧18 h，37 ℃复氧24 h的方法建立冷缺氧复氧模型，检测细胞活力和LDH活性；Western blot法检测NF-κB和NLRP3的表达；免疫荧光染色法检测p-NF-κB的表达。 结果:动物实验：与C组比较，I/R组MDA含量升高，移植物跳动评分和SOD活性降低，p-NF-κB、NLRP3、ACS和caspase-1表达、IL-1β、TNF-α及IL-6 mRNA表达上调( P<0.05)，心肌组织病理学损伤加重；与I/R组比较，I/R+VB组MDA含量降低，移植物跳动评分和SOD活性升高，p-NF-κB、NLRP3、ACS和caspase-1表达、IL-1β、TNF-α及IL-6 mRNA表达下调( P<0.05)，心肌组织病理学损伤减轻。细胞实验：与C组比较，H/R组细胞活力降低，LDH活性升高，p-NF-κB、NLRP3、ACS、caspase-1和p-NF-κB表达上调( P<0.05)；与H/R组比较，H/R+VB组细胞活力升高，LDH活性降低，p-NF-κB、NLRP3、ACS、caspase-1和p-NF-κB表达下调( P<0.05)。 结论:毛蕊花苷可减轻小鼠异位心脏移植冷缺血再灌注损伤，其机制与抑制NF-κB/NLRP3信号通路激活有关。

目的:探讨硫酸吲哚酚(IS)通过有机阴离子转运蛋白-3(OAT-3)及氧化应激诱导心肌肥大及纤维化的作用。方法:对大鼠心肌细胞(H9C2)进行传代培养，并分为四组：Control组、IS组、小干扰RNA(siRNA)阴性对照组(siOAT-3)及siOAT-3+IS组。Control组常规培养，不进行IS刺激；IS组加入含250 μmol浓度的IS刺激；siRNA阴性对照组加入20 nmol/L OAT-3 siRNA；siOAT-3+IS组加入20 nmol/L OAT-3 siRNA 48 h后，加入IS刺激24 h。采用RT-PCR方法检测并分析各组细胞中OAT-3、NADPH氧化酶-4(Nox-4)、抗氧化蛋白[核因子E2相关因子2(Nrf-2)、血红素加氧酶1(HO-1)]、心肌肥大指标[心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、β-肌球蛋白重链基因(β-MHC)]及纤维化指标[转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad同源物3(Smad-3)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)]的mRNA表达水平。H9C2细胞进一步分为Control组、IS组以及N-乙酰半胱氨酸(NAC)组，NAC组以抗氧化剂NAC预处理后加入250 μmol浓度的IS刺激24 h，采用RT-PCR试验方法检测上述指标的mRNA表达水平。结果:IS组H9C2细胞中OAT-3的mRNA表达水平显著高于Control组，siOAT-3组及siOAT-3+IS组H9C2细胞中OAT-3的mRNA表达水平显著低于IS组( P<0.001)。相较于Control组，IS组H9C2细胞中Nox-4、ANP、BNP、β-MHC、TGF-β1、Smad-3以及Collagen Ⅰ的mRNA表达水平明显升高(均 P<0.001)，Nrf-2、HO-1的mRNA表达水平明显降低(均 P<0.001)。相较于IS组，siOAT-3组及siOAT-3+IS组H9C2细胞中Nox-4、ANP、BNP、β-MHC、TGF-β1、Smad-3以及Collagen Ⅰ的mRNA表达水平明显降低(均 P<0.001)，Nrf-2、HO-1的mRNA表达水平明显升高(均 P<0.001)。以NAC预处理H9C2细胞，能显著抑制IS诱导的Nox-4、ANP、BNP、β-MHC、TGF-β1、Smad-3以及Collagen Ⅰ mRNA的高表达(均 P<0.001)，显著增高Nrf-2、HO-1 mRNA表达水平(均 P<0.01)。 结论:IS在H9C2细胞中通过OAT-3和氧化应激诱导心肌肥大和纤维化因子高表达。

目的:评价番茄红素预处理对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤时Toll样受体(TLRs)/NF-κB信号通路的影响。方法:体外培养大鼠H9C2心肌细胞，以8×10 4个/ml的密度接种于培养皿中，采用随机数字表法分为3组( n＝30)：对照组(C组)、缺氧复氧组(H/R组)和番茄红素预处理组(LP组)。H/R组、LP组心肌细胞缺氧6 h后复氧制备缺氧复氧损伤模型；LP组于造模前12 h时加入浓度为20 μmol/L番茄红素进行预处理。采用CCK-8法测定心肌细胞活力；采用流式细胞术(Annexin V/PI双染法)检测心肌细胞凋亡率；采用微板法检测细胞培养液LDH、细胞SOD、MDA及ROS的水平；采用Western blot法检测TLR2、TLR3和NF-κB的表达水平。 结果:与C组相比，H/R组和LP组细胞活力和SOD水平降低，细胞凋亡率、LDH、MDA和ROS水平升高，TLR2、TLR3和NF-κB表达上调( P<0.05)；与H/R组相比，LP组细胞活力和SOD水平升高，细胞凋亡率、LDH、MDA和ROS水平降低，TLR2、TLR3和NF-κB表达下调( P<0.05)。 结论:番茄红素预处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的机制可能与抑制TLRs/NF-κB信号通路激活，抑制氧化应激反应有关。

目的:探讨槲皮素（quercetin, QUE）减轻H9c2心肌细胞缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation，H/R）损伤的可能机制及叉头框蛋白O3（forkhead box O3, FOXO3）在其中的作用。方法:以大鼠心肌细胞株H9c2为研究对象，按随机数字表法分为5组（每组6个复孔）：正常对照组（CON组）、缺氧/复氧组（H/R组）、QUE组、QUE+FOXO3干扰小RNA（small interfering RNA, siRNA）组（QUE+si组）、QUE+阴性对照组（QUE+NC组）。采用缺氧6 h复氧6 h制备H/R损伤模型。CON组细胞正常培养；H/R组细胞制备H/R损伤模型；QUE组给予终浓度为20 μmol/L的QUE孵育24 h后制备H/R损伤模型；QUE+si组和QUE+NC组分别用FOXO3 siRNA和FOXO3 siRNA阴性对照转染细胞，24 h后给予终浓度为20 μmol/L的QUE再孵育24 h，然后制备H/R损伤模型。采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8, CCK-8）法检测各组细胞活力，DCFH-DA法检测各组细胞活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平，ELISA法检测各组细胞中丙二醛（malondialdehyde, MDA）含量和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）活力，Western blot法检测FOXO3、超氧化物歧化酶2（superoxide dismutase, SOD2）蛋白水平。Hoechst33258染色法检测各组H9c2心肌细胞凋亡情况。结果:与CON组比较：H/R组、QUE+NC组、QUE+si组细胞活力下降（ P<0.05），H/R组、QUE组、QUE+NC组、QUE+si组ROS水平升高（ P<0.05）；H/R组、QUE+si组MDA含量升高（ P<0.05），SOD活力下降（ P<0.05）；H/R组FOXO3、SOD2表达下调（ P<0.05）；H/R组、QUE组、QUE+NC组、QUE+si组细胞凋亡率增加（ P<0.05）。与H/R组比较：QUE组细胞活力升高（ P<0.05），FOXO3、SOD2表达上调（ P<0.05）；QUE组、QUE+NC组ROS水平下降（ P<0.05），MDA含量减少（ P<0.05），SOD活力升高（ P<0.05），细胞凋亡率下降（ P<0.05）。与QUE+NC组比较，QUE+si组细胞活力下降（ P<0.05），ROS水平升高（ P<0.05），MDA含量升高（ P<0.05），SOD活力下降（ P<0.05），FOXO3、SOD2表达下调（ P<0.05），细胞凋亡率增加（ P<0.05）。QUE+NC组与QUE组细胞活力、ROS水平、MDA含量、SOD活力和细胞凋亡率差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:QUE可减轻H9c2心肌细胞H/R损伤，其机制可能与提高FOXO3蛋白水平，上调抗氧化基因SOD2的表达有关。

目的:探讨沉默长链非编码RNA SNHG7(LncRNA SNHG7)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation，H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及其对miR-181b-5p的靶向调控作用。方法:体外培养大鼠H9c2心肌细胞，将其随机分为对照组、H/R组、H/R+si-NC组、H/R+si-SNHG7组、H/R+si-SNHG7+anti-miR-NC组和H/R+si-SNHG7+anti-miR-181b-5p组。检测乳酸脱氢酶、丙二醛的含量与超氧化物歧化酶的活性；用流式细胞术检测细胞凋亡率；用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SNHG7、miR-181b-5p的表达量；用双荧光素酶报告实验验证SNHG7、miR-181b-5p的靶向关系；蛋白免疫印迹法检测Bax和Bcl-2蛋白的表达量。结果:与对照组相比，H/R组心肌细胞中SNHG7的表达显著升高( P<0.05)，miR-181b-5p的表达水平显著降低( P<0.05)，乳酸脱氢酶、丙二醛的含量显著升高( P<0.05)，超氧化物歧化酶的活性显著降低( P<0.05)，细胞凋亡率显著升高( P<0.05)，Bax蛋白水平显著升高( P<0.05)，Bcl-2蛋白水平显著降低( P<0.05)；与H/R组、H/R+si-NC组相比，H/R+si-SNHG7组乳酸脱氢酶、丙二醛的含量显著降低( P<0.05)，超氧化物歧化酶的活性显著升高( P<0.05)，细胞凋亡率显著降低( P<0.05)，Bax蛋白水平显著降低( P<0.05)，Bcl-2蛋白水平显著升高( P<0.05)；双荧光素酶报告实验证实SNHG7可靶向结合miR-181b-5p；干扰miR-181b-5p的表达可减弱沉默SNHG7对H/R诱导的心肌细胞氧化应激及细胞凋亡的作用。 结论:沉默SNHG7可能通过上调miR-181b-5p的表达抑制H/R诱导的心肌细胞氧化应激及细胞凋亡，从而对心肌细胞发挥保护作用。

目的:制备含锂生物玻璃(Li/BGs)纳米材料，并探讨其对大鼠心肌样细胞(H9C2)和人类脐静脉内皮细胞(HUVECs)的生物相容性。方法:采用溶胶-凝胶法，将0.7 g十六烷基三甲基溴化铵、10 ml乙酸乙酯、7 ml 1 mol/L氨水、3.6 ml正硅酸四乙酯、3.57 g四水硝酸钙和0.37 g碳酸锂反应至少4 h，制备Li/BGs。扫描电子显微镜(SEM)观察Li/BGs纳米颗粒的尺寸和形态。H9C2和HUVECs分别置于10~1 000 μg/ml浓度的Li/BGs培养基中，细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞毒性实验(450 nm吸光度值)评估细胞活性。细胞在10 μg/ml浓度的Li/BGs溶液中培养24 h后，采用鬼笔环肽染色法(Phalloidin)和4’，6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色，观察细胞核(蓝色)和细胞骨架蛋白(红色)的共聚焦显微镜图像，评估Li/BGs对细胞形态的影响。组间比较采用单因素方差分析分析数据统计学差异。结果:SEM观察显示，制备的Li/BGs颗粒近球形，粗糙且均匀，直径(82.86±14.28) nm。H9C2经钙黄绿素乙酰氧基甲酯/碘化丙啶(Calcein AM/PI)染色后，大部分细胞展现出活跃状态，未出现细胞的明显死亡。在细胞毒性试验中，250 μg/ml组、500 μg/ml组及1 000 μg/ml组低于H9C2对照组(0.287±0.005、0.317±0.009、0.347±0.025比0.825±0.188， F＝24.72， P<0.001)。Li/BGs处理HUVECs后250 μg/ml组、500 μg/ml组及1 000 μg/ml组低于HUVECs对照组(0.289±0.003、0.320±0.013、0.354±0.021比1.026±0.027， F＝34.44， P<0.001)。Phalloidin和DAPI染色显示两种细胞的Li/BGs组与对照组比较，Li/BGs组细胞骨架保持正常的形状和结构，未出现断裂、异常凝聚或形状改变等现象。 结论:Li/BGs对细胞的形态和结构无明显影响，具有良好的生物相容性。

目的:研究微小RNA(miR)-139-3p对H 2O 2诱导的大鼠心肌细胞系H9c2细胞氧化应激的影响及其可能机制。 方法:分别将miR-139-3p模拟物(mimics)及其阴性对照(miR-NC)、性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4(Sox4)过表达载体(pc-Sox4)及其对照(pcDNA3.1)转染H9c2细胞，细胞共分为6组：对照组、H 2O 2组、mimic组(转染mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、pcDNA3.1组(转染mimics和pcDNA3.1)和pc-Sox4组(转染mimics和pc-Sox4)，除对照组外的其他细胞均在转染后建立H 2O 2诱导的H9c2细胞氧化应激损伤模型。细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测H9c2细胞活力；比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)的含量；原位缺口末端标记法(TUNEL)染色检测H9c2细胞凋亡；蛋白质印迹法(Western blot)检测Sox4表达；荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-139-3p表达水平；生物信息学网站预测miR-139-3p与Sox4的互补结合位点，双荧光素酶报告基因实验验证两者之间的靶向关系。各组间差异比较采用方差分析。 结果:H 2O 2组H9c2细胞miR-139-3p水平低于对照组(0.28±0.03比1.00±0.01， t＝11.484， P<0.05)，miR-139-3p过表达后mimics组细胞活力高于miR-NC组(0.71±0.07比0.44±0.04， t＝7.348， P<0.05)、LDH水平低于miR-NC组[(48.21±6.38) U/L比(69.76±7.32) U/L， t＝4.759， P<0.05]、细胞凋亡率低于miR-NC组[(21.31±4.02)%比(47.28±5.69)%， t＝8.851， P<0.05]。使用TargetScan生物预测网站预测和双荧光素酶报告基因实验证实Sox4是miR-139-3p的靶基因，同时miR-139-3p上调使mimic组Sox4蛋白低于miR-NC组(2.54±0.41比5.38±0.73， t＝4.212， P<0.05)。Sox4过表达逆转了miR-139-3p对H 2O 2诱导的细胞损伤的作用，pc-Sox4组Sox4蛋白表达高于pc-DNA3.1组(5.25±0.71比2.61±0.47， t＝4.212， P<0.05)、细胞活力低于pc-DNA3.1组(0.45±0.07比0.69±0.08， t＝7.788， P<0.05)、LDH水平高于pc-DNA3.1组[(68.62±7.55) U/L比(44.76±5.21) U/L， t＝9.368， P<0.05]，细胞凋亡率高于pc-DNA3.1组[(41.24±7.36)%比(24.76±4.28)%， t＝9.578， P<0.05]。 结论:H 2O 2处理的心肌细胞中miR-139-3p表达下调，miR-139-3p表达上调可通过抑制Sox4减轻H 2O 2诱导的心肌细胞氧化应激损伤。

目的:探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）是否通过调控超快速延迟整流钾电流（ Ikur）参与心房肌细胞的电重塑，以及Src激酶是否参与其中。 方法:将大鼠胚胎心肌细胞株H9c2细胞置于DMEM培养基中，将小鼠心房肌细胞株HL-1细胞置于Claycomb培养基中，于37 ℃ 5% CO 2培养箱中培养。以正常培养的细胞为对照组。予以不同浓度TNF-α干预细胞24 h，分别为TNF-α 25 ng/ml组、TNF-α 50 ng/ml组和TNF-α 100 ng/ml组。为观察Src抑制剂PP1能否逆转TNF-α作用，设置PP1+TNF-α组：先予10 μmol/L的PP1预处理1 h后再加入100 ng/ml TNF-α干预细胞24 h。采用Western blot检测各组细胞中形成 Ikur的主要钾通道蛋白Kv1.5、Src的表达水平。采用全细胞膜片钳检测各组细胞的 Ikur密度。 结果:（1）H9c2细胞中，TNF-α 100 ng/ml组细胞的Kv1.5蛋白表达水平低于对照组及TNF-α 25 ng/ml组（ P均<0.05）。各组细胞间Src蛋白表达水平差异无统计学意义（ P>0.05），但TNF-α 25 ng/ml组、TNF-α 50 ng/ml组及TNF-α 100 ng/ml组细胞磷酸化Src（p-Src）蛋白表达水平均高于对照组（ P均<0.05）。TNF-α 50 ng/ml组及TNF-α 100 ng/ml组细胞 Ikur电流密度均小于对照组（ P均<0.05）。PP1+TNF-α组细胞Kv1.5蛋白表达水平高于TNF-α 100 ng/ml组（ P<0.05）， Ikur电流密度大于TNF-α 100 ng/ml组（ P<0.01）。PP1+TNF-α组细胞Kv1.5蛋白表达水平及 Ikur电流密度与对照组比较差异均无统计学意义（ P均>0.05）。（2）在心房肌细胞株HL-1细胞中，TNF-α 100 ng/ml组细胞Kv1.5蛋白表达水平低于对照组和TNF-α 25 ng/ml组（ P均<0.01）。TNF-α 100 ng/ml组细胞p-Src蛋白表达水平高于对照组（ P<0.05）。各组细胞Src蛋白表达水平差异无统计学意义（ P>0.05）。PP1+TNF-α组细胞Kv1.5蛋白表达水平高于TNF-α 100 ng/ml组（ P<0.05）。 结论:在心房肌细胞中，TNF-α可能通过激活Src激酶降低Kv1.5蛋白表达水平，进而下调 Ikur，参与心房颤动的发生及发展过程。

目的:评价c-Abl在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法:SPF级健康雄性SD大鼠60只，7～9周龄，体重210～230 g，采用随机数字表法将大鼠分成6组：假手术组(S组， n＝6)、心肌缺血再灌注组(IR组， n＝12)、糖尿病假手术组(DS组， n＝6)、糖尿病心肌缺血再灌注组(DIR组， n＝12)、糖尿病心肌缺血再灌注＋AVV9-siRNA-c-Abl组(DIR＋c-Abl组， n＝12)和糖尿病心肌缺血再灌注＋AVV9-GFP组(DIR＋GFP组， n＝12)。采用腹腔注射1%链脲佐菌素-柠檬酸盐缓冲液60 mg/kg的方法制备1型糖尿病模型。DIR＋c-Abl组和DIR＋GFP组于糖尿病建模后4周尾静脉缓慢注射AVV9-siRNA-c-Abl和AVV9-GFP 1×10 12 mg/kg。糖尿病建模后8周，采用结扎冠状动脉左前降支30 min再灌注2 h的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型。再灌注结束时记录左心室收缩压(LVSP)和左心室收缩压上升和下降最大速率(±dp/dt max)，取血样，采用ELISA法检测血清LDH和CK-MB浓度，TTC法检测心肌梗死面积(除S组和DS组)，TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡指数，Western blot法检测心肌组织c-Abl、p53、活化caspase-3的表达水平，免疫共沉淀法检测心肌组织c-Abl与p53的结合水平(c-Abl/p53)。 结果:IR组与S组相比、DIR组与DS组相比LVSP和±dp/dt max降低，血清LDH和CK-MB浓度升高，凋亡指数和c-Abl/p53升高，c-Abl、p53和活化caspase-3表达上调( P<0.05)；与DIR组相比，DIR＋c-Abl组LVSP和±dp/dt max升高，血清LDH和CK-MB浓度降低，心肌梗死面积减小，凋亡指数和c-Abl/p53降低，c-Abl、p53和活化caspase-3表达下调( P<0.05)，DIR＋GFP组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:c-Abl可能通过激活p53信号通路，参与糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的病理生理过程。