基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶A(AKT)信号通路探讨miR-26a对急性胰腺炎细胞AR42J凋亡与增殖的影响.将细胞分为4组:正常组、模型组(100 nmol/L雨蛙素)、miR-26a NC组(100 nmol/L雨蛙素+miR-26a NC)和 miR-26a inhibitor组(100 nmol/L雨蛙素+miR-26a inhibitor).MTT法检测细胞活力,AnnexinV-PI流式双染法检测细胞凋亡率,ELISA法检测IL-6、TNF-α水平,Western blot检测细胞中Bax、Bcl-2、cleaved caspase 3、PI3K及p-AKT蛋白表达.与正常组比较,模型组及miR-26a NC组细胞活力降低(P＜0.01),细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、IL-6、TNF-α水平、Bax、Cleaved caspase 3、PI3K、p-AKT表达量均升高(P＜0.01),Bcl-2 表达量降低(P＜0.01);与模型组及miR-26a NC组比较,miR-26a inhibitor组细胞活力升高(P＜0.01),细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、IL-6、TNF-α 水平、Bax、Cleaved caspase 3、PI3K、p-AKT表达量均降低(P＜0.01),Bcl-2 表达量升高(P＜0.01).miR-26a通过调控PI3K/AKT信号通路影响雨蛙素诱导的AR42J细胞的增殖与凋亡.

目的 基于非靶向代谢组学研究毛蕊异黄酮对氯化血红素诱导的PC12细胞损伤的保护作用及机制.方法 采用氯化血红素构建PC12细胞损伤模型.CCK-8法检测细胞增殖及凋亡情况,LC-MS法检测细胞非靶代谢组学.通过单变量统计分析、多维统计分析进行差异代谢物的筛选,通过KEGG通路富集分析找出差异代谢物可能参与的代谢通路.结果 与对照组比较,毛蕊异黄酮组PC12细胞存活率升高(P＜0.05),细胞凋亡率降低(P＜0.05),Bcl-2 mRNA表达升高(P＜0.05),Bax mRNA表达降低(P＜0.05).通过非靶代谢组学研究发现了 10个特异性代谢物,通路富集分析发现嘌呤代谢可能是毛蕊异黄酮保护氯化血红素所致细胞凋亡的主要通路.结论 毛蕊异黄酮可能通过调控嘌呤代谢抑制氯化血红素所致PC12细胞的凋亡从而发挥保护作用.

目的:探究硫氧还蛋白(TXN)在胰腺癌中的表达及对胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响.方法:通过收集泛癌和TCGA胰腺癌转录组和临床数据,分析TXN家族基因的表达水平.通过荧光定量PCR(RT-qPCR)技术、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TXN在癌组织与癌旁组织中及不同细胞系的表达水平.通过使用小干扰RNA(siRNA)抑制胰腺癌Panc-1、BxPC-3细胞中TXN基因的表达,并与未抑制TXN基因表达的Panc-1、BxPC-3细胞进行对照实验,进而探究TXN对这2种细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响.使用转录组数据和生存结果资料,以TXN表达中位值分为两组,绘制TXN高低表达两组的生存曲线图.结果:在胰腺癌组织和细胞中,TXN的表达水平明显高于癌旁组织和正常细胞(P＜0.05).抑制胰腺癌细胞的TXN的表达水平后,低表达的TXN水平的胰腺癌细胞增殖率、侵袭细胞数量、愈合率低于对照组的胰腺癌细胞,其凋亡率较正常胰腺癌细胞明显升高(P＜0.05).TXN在胰腺癌患者肿瘤内表达水平越高,其生存时间越短(P＜0.05).结论:TXN能增强胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,并减弱细胞凋亡程度;胰腺癌组织中TXN表达量越高,预后越差.

目的:探究纤维粘连蛋白(FN)靶向JAK/STAT3信号通路调控粘连性肠梗阻的作用机制.方法:选取2019年1月-2020年12月就诊行肠切除手术的粘连性肠梗阻患者65例(观察组),同期行腹股沟疝手术患者65例(对照组),取患者肠组织及术前血液样本,采用qRT-PCR、Western blot及免疫组织化学实验检测肠组织样本中FN、STAT3、p-STAT3基因及蛋白表达,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清样本中FN表达.体外培养人肠上皮细胞系HIEC-6,采用慢病毒转染抑制细胞FN表达,采用CCK8、Transwell迁移实验观察FN对细胞增殖及分化的影响,同时采用qRT-PCR、Western Blot实验检测FN对细胞STAT3、p-STAT3表达的影响.结果:与对照组比较,观察组肠组织中FN mRNA及蛋白表达明显较高(P＜0.05),STAT3、p-STAT3 mRNA及蛋白表达则明显较低(P＜0.05),且观察组血清中分泌型FN含量也明显较高(P＜0.05).体外实验显示,与NC siRNA组HIEC-6细胞比较,LV-FN siRNA组HIEC-6细胞在48、72、96、120 h的增殖率均明显较低(P＜0.05),细胞迁移能力也明显较低(P＜0.05),其FN mRNA及蛋白表达明显较低(P＜0.05),STAT3、p-STAT3 mRNA及蛋白则明显较高(P＜0.05).结论:纤维粘连蛋白在粘连性肠梗阻患者肠组织及血清中呈明显高表达,可通过JAK/STAT3信号通路的异常激活影响细胞的增殖和迁移,引I起病变肠段发病.

肿瘤是一类严重威胁人类生命健康的疾病,已经成为世界范围内的主要公共卫生问题,且在我国致死率居高不下[1-2].失控的细胞增殖和生长是引起肿瘤最主要原因.

目的:研究CP-31398对表达突变型p53GBC-SD和表达野生型p53NOZ胆囊癌细胞株增殖和转移的影响.方法:突变型p53GBC-SD中加入药物CP-31398为CP-31398组,未加药组为对照组;野生型p53NOZ中加入药物CP-31398为CP-31398组,未加药组为对照组.利用CCK8细胞增殖实验检测CP-31398对野生型及突变型p53胆囊癌细胞增殖的影响;利用流式细胞术检测CP-31398对胆囊癌细胞周期及凋亡的影响;利用Transwell实验检测CP-31398对胆囊癌细胞迁移和侵袭的影响;利用Western blot检测CP-31398对p53蛋白表达情况的影响,并对相关机制进行探讨.结果:在突变型p53GBC-SD细胞中,CCK8细胞增殖实验显示CP-31398组较对照组胆囊癌细胞的增殖速度减慢(P＜0.01);周期实验显示与对照组相比,CP-31398组的细胞处在S期的细胞比例上升,处在G0、G1期的细胞比例下降,所以细胞在S期被阻断(P＜0.001);凋亡实验显示对照组的凋亡率明显低于CP-31398 组(P＜0.05);Transwell实验显示,对照组穿过小室的细胞数目高于CP-31398组;Western blot实验说明CP-31398组p53蛋白表达量增加(P＜0.05).在表达野生型p53NOZ细胞中,CCK8细胞增殖实验显示CP-31398组较对照组胆囊癌细胞的增殖速度减慢(P＜0.001);周期实验显示处在G2、M期的细胞比例明显上升,处于G0、G1期的细胞比例下降,细胞被阻滞于G2、M期(P＜0.001);凋亡实验显示对照组的凋亡率是(14.04±3.08)％,CP-31398 组的凋亡率是(34.55±3.30)％(P＜0.01);Transwell 实验显示,对照组穿过小室的细胞数目高于CP-31398组;Western blot实验显示CP-31398组p53蛋白表达量增加(P＜0.01).结论:CP-31398有效抑制胆囊癌细胞的增殖及转移,并且不依赖p53的突变,且CP-31398对表达野生型p53的NOZ胆囊癌细胞株作用效果较好,可以作为胆囊癌药物治疗的一个新选择.

目的:探讨Ⅴ型胶原蛋白α2(COL5A2)在胃癌组织中表达情况及其对胃癌细胞BGC823表型影响,并研究其相关影响机制.方法:收集手术切除的胃癌组织及相应癌旁正常组织各18例,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blotting检测COL5A2表达差异.人胃癌细胞株BGC823转染siRNA,敲低COL5A2基因在细胞中表达量,通过qRT-PCR及Western blotting验证转染效率.通过克隆形成实验检测各组细胞增殖变化,Transwell检测细胞侵袭变化,Western blotting检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白MMP9、Wnt、β-catenin表达.结果:与癌旁正常组织相比,胃癌组织中COL5A2蛋白表达增高(P<0.05).沉默COL5A2表达后,BGC823细胞增殖及侵袭能力均降低(P<0.05),且MMP9、Wnt、β-catenin蛋白表达量均下调(P<0.05).结论:COL5A2蛋白表达在胃癌组织中表达上调,并且可能通过Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌细胞增殖及侵袭.

目的:探讨LINC00665靶向调控微小RNA(miR)-34a-5p对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法:选取食管癌病人肿瘤组织及癌旁组织,采用qRT-PCR法检测组织中LINC00665、miR-34a-5p表达水平.以食管癌细胞株EC9706为研究对象,设置对照组、阴性转染(siNC)组、LINC00665小干扰RNA载体(siLINC00665)组、siLINC00665+inhibitor阴性转染(anti-NC)组、siLINC00665+miR-34a-5p inhibitor(anti-miR-34a-5p)组,CCK-8法检测各组细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞侵袭、迁移数;Western blotting检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、细胞周期素D1(CyclinD1)、p21蛋白表达水平;双荧光素酶实验验证LINC00665和miR-34a-5p的靶向关系.结果:食管癌病人肿瘤组织LINC00665表达水平较癌旁组织明显增加,miR-34a-5p表达水平明显下降(P<0.01).与对照组、siNC组相比,siLINC00665组细胞OD值(24、48 h)、侵袭和迁移数、CyclinD1、MMP-2蛋白、LINC00665表达均降低,p21蛋白、miR-34a-5p表达均增加(P<0.05);与siLINC00665+anti-NC组相比,siLINC00665+anti-miR-34a-5p组细胞OD值(24、48 h)、侵袭和迁移数、CyclinD1、MMP-2蛋白、LINC00665表达均增加,p21蛋白、miR-34a-5p表达均降低(P<0.05).双荧光素酶实验证实LINC00665和miR-34a-5p靶向关系.结论:沉默LINC00665可靶向上调miR-34a-5p表达,进而抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力.

目的 采用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)、分子对接和体外细胞实验探讨健脾益气方对肝癌细胞的影响.方法 制备健脾益气方甲醇水溶液并采用UHPLC-MS/MS法分析鉴定中药活性成分.利用Schrodinger软件对鉴定出的所有活性成分及信号通路核心靶点白介素6(IL-6)、糖蛋白130(gp130)、酪氨酸激酶1(JAK1)、酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导蛋白及转录激活子3(STAT3)、程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)和程序性细胞死亡配体1(PD-L1)分别进行分子对接;并用Pymol软件将各靶标蛋白结合能最低的活性成分对接模式进行可视化.采用健脾益气方含药血清干预人肝癌细胞株HepG2进行体外实验验证,将HepG2细胞分为空白组,模型组,健脾益气方低、中、高剂量组(5.25、10.5、21 g/kg),STAT3 抑制组(C188-9,4 μmol/L)和 gp130 抑制组(SC144,10 μmol/L).除空白组外,模型组加入IL-6(50 ng/mL),各给药组加入IL-6和相应药物进行干预.采用CCK-8法、Transwell培养小室法、Annexin V+PI双染色法分别检测各组细胞存活率、侵袭数和凋亡率,ELISA法检测各组细胞培养液中IL-6水平,Western blot法检测各组细胞中gp130、磷酸化JAK1(p-JAK1)、磷酸化JAK2(p-JAK2)、磷酸化STAT3(p-STAT3)、PD-1和PD-L1蛋白表达.结果 UHPLC-MS/MS鉴定出健脾益气方113个活性成分.分子对接结果显示,健脾益气方中有多个活性成分与IL-6、gp130、JAK1、JAK2、STAT3、PD-1和PD-L1靶点蛋白均分别存在分子结合位点且有较低结合能,均小于-5.0 kcal/mol.体外细胞实验显示,与空白组比较,模型组细胞侵袭数升高(P＜0.01),细胞凋亡率则降低(P＜0.01);培养液中 IL-6 水平升高(P＜0.01);gp130、p-JAK1、p-JAK2、p-STAT3、PD-1 和 PD-L1蛋白表达均升高(P＜0.01).与模型组比较,除低剂量健脾益气方含药血清对细胞侵袭数的抑制和对细胞凋亡率的影响无明显变化外(P＞0.05),其它各药物干预组均可抑制模型细胞的增殖与侵袭能力,促进细胞凋亡(P＜0.01);各药物干预组均可降低模型细胞培养液中IL-6水平(P＜0.01);并降低细胞中gp130、p-JAK1、p-JAK2、p-STAT3、PD-1和PD-L1蛋白表达(P＜0.01).结论 健脾益气方可通过多成分调控肝癌细胞IL-6/STAT3炎症信号通路及其介导的PD-L1和固有PD-1的表达,抑制肝癌细胞增殖侵袭,促进细胞凋亡.

目的:探讨分选蛋白(SNX)17通过激活表皮生长因子受体(EGFR)影响胰腺癌细胞侵袭、增殖和迁移能力。方法:采集3例人胰腺癌组织及癌旁组织样本，自2021年1月至2021年3月收集于贵州医科大学附属manbet官网登录 肝胆外科，用免疫组织化学(IHC)染色检测癌组织与癌旁组织中SNX17的表达量。用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测胰腺癌细胞系中SNX17的相对表达量；用空siRNA以及两种敲低SNX17的小干扰RNA(siRNA)分别转染上述细胞，分组为NC组、SNX17-si1组和SNX17-si2组。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)、平板克隆实验检测胰腺癌细胞的增殖能力，Transwell及划痕实验检测胰腺癌细胞迁移能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测在SNX17敲低的癌细胞中EGFR以及细胞外调节激酶(ERK)的相对表达量差异。最后在胰腺癌细胞中共转染siRNA以及EGFR的过表达质粒进行功能回复实验(分组为NC组、SNX17-si1组、EFGR-overexpression+SNX17-si1组)，组间比较采用 t检验，组内两两比较采用LSD- t检验。 结果:免疫组织化学检测结果显示癌组织中SNX17相对表达量高于癌旁组织(5.750±1.323， t＝4.345， P<0.05)，差异有统计学意义。RT-qPCR发现在胰腺癌细胞系中，人胰腺癌细胞-2(MIA PaCa-2，19.240±2.048、 t＝8.844， P<0.05)和人胰腺癌细胞-1(PANC-1，5.796±1.256， t＝3.712， P<0.05)细胞中SNX17相对表达量显著高于其他胰腺癌细胞系，差异有统计学意义。CCK-8实验技术结果显示，SNX17-si1组、SNX17-si2组低于NC组吸光度值(0.707±0.059比0.346±0.075比1.109±0.052比0.602±0.047， t＝12.060、4.642、21.440、12.750， P<0.01)，差异有统计学意义。平板克隆结果显示转染组细胞集落数减少。划痕实验结果显示敲低SNX17降低细胞的侵袭能力。Transwell迁移实验结果显示，SNX17-si1组、SNX17-si2组单位视野穿过的细胞数低于NC组[(666.300±14.400)个比(574.300±10.800)个比(129.300±4.300)个比(93.700±3.100)个， t＝46.260、53.220、29.850、15.450， P<0.01]，差异有统计学意义。而侵袭实验结果表示，SNX17-si1组、SNX17-si2组单位视野穿过的细胞数低于NC组[(137.5±20.1)个比(100.8±17.4)个比(324.5±7.9)个比(289.8±10.2)个， t＝6.836、5.807、41.020、28.430， P<0.01]，差异有统计学意义。Western blot检测结果显示，SNX17-si1组与SNX17-si2组EGFR的相对表达量低于NC组(0.477±0.032比0.278±0.042比0.853±0.053比0.826±0.050， t＝14.920、6.640、16.130、16.430， P<0.01)，差异有统计学意义。在回复实验中，CCK-8、Transwell实验及划痕实验证明共转染EGFR-overexpression+SNX17-si1逆转敲低SNX17所导致的胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的降低。最后用Western blot结果表明，共转染组比较单独转染SNX17-si1的组别，EGFR的相对表达量分别增高(0.712±0.010、 t＝70.220， P<0.05；1.002±0.027、 t＝37.580， P<0.05)，差异均有统计学意义。 结论:SNX17通过影响EGFR促进胰腺癌细胞MIA PaCa-2和PANC-1的增殖、侵袭、迁移能力。