目的 探讨左心耳(LAA)相关测量参数在基于心脏计算机断层扫描成像(cardiac computed tomography angiography,CCTA)的自动分割测量与手动测量方法 的一致性.方法 回顾性收集 2016 年 12 月 1 日～2020 年 3 月 31 日在解放军总manbet官网登录 心血管医学部接受CCTA检查的非瓣膜性房颤患者 168 例.以专业ManBetX万博官网地址下载 的手动测量结果 作为金标准,使用Bland-Atman统计方法 分别对使用Anythink β软件自动测量的左心耳开口平面周长、最长径、最短径,左心耳容积,开口平面与轴断面、矢状面、冠状面的夹角等参数进行一致性分析.结果 左心耳自动测量与手动测量中开口的周长、最长径、最短径的一致性评价组内相关系数(ICC)值分别为0.93、0.854、0.935(P<0.01).Bland-Altman分析显示左心耳自动测量开口平面周长、最长径、最短径,左心耳容积,开口平面与轴断面、矢状面、冠状面的夹角与手动测量值的差值超出 95%一致性限范围的点数均<10%,一致性良好.结论 基于CCTA的左心耳自动分割测量方法 可以自动完成LAA形态的识别和相关参数的测量,高效准确,可重复性高,可将其作为一种左心耳封堵术(LAAO)术前评估的测量工具.

建立了UPLC-PDA波长切换法同时测定红参和黑参中麦芽酚及 17 种皂苷含量的方法,并比较红参和黑参 2 种不同人参加工品之间的质量差异.采用Waters HSS T3 色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm),以乙腈(A)-0.1%磷酸水(B)为流动相进行梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1,柱温30℃,进样量2 μL,波长切换方式0～11 min为273 nm,11～60 min为203 nm.对多批次红参和黑参样品含量测定结果进行聚类分析(HCA)和主成分分析(PCA),评价其质量差异性.结果显示,18 种目标成分在一定质量浓度范围内均呈良好的线性关系,相关系数(r)均大于0.999 1;精密度、重复性和稳定性的相对标准偏差(RSD)均小于 5.0%;平均加样回收率为 95.93%～104.2%,RSD为 1.8%～4.2%.定量测定结果显示红参和黑参样品间存在一定差异,并且HCA和PCA这 2 种分析方式均可直观区分红参和黑参 2 类人参加工品.该方法准确、可靠、重复性好,可用于红参和黑参中麦芽酚及 17 种皂苷成分的含量测定,同时为红参和黑参的质量评价和综合利用提供基础资料.

目的 采用UV法测定枸橼酸西地那非口崩片的含量均匀度.方法 以0.01 mol·L-1盐酸为溶剂,在292 nm处用紫外分光光度计快速测定枸橼酸西地那非口崩片的含量均匀度.结果11.14～39.89 μg·mL-1枸橼酸西地那非对照品与吸光度呈良好的线性关系;平均回收率为101.42％,RSD为0.40％;配制的样品溶液在8 h内稳定;3批枸橼酸西地那非口崩片的含量均匀度均在合格范围内,A+2.2S分别为3.54、1.98、2.70,与 HPLC法比较无明显差异.结论 所用方法操作简便快速、经济、重复性良好,可用于枸橼酸西地那非口崩片含量均匀度的测定.

目的:建立采用1H定量核磁共振波谱法(1H qNMR)测定帕瑞昔布钠对照品质量分数的方法.方法:在1H qNMR中,使用Bruker Ascend 600超导核磁共振谱仪,以氘代二甲基亚砜为溶剂,采用zg30脉冲序列,弛豫延迟时间为30s,扫描次数为64次.结果:以帕瑞昔布钠δ7.74的氢质子响应信号作为样品定量信号,以马来酸86.23的氢质子响应信号作为内标物定量信号.样品内标物信号响应面积比与质量比的线性回归方程为y=0.296 2x-0.001 0,相关系数为0.999 7,重复性实验的RSD为0.15％(n=6).测得帕瑞昔布钠(以C19H17N2O4S-计)的质量分数为93.91％,与质量平衡法(93.83％,按C19H17N2O4S-计)、HPLC外标一点法(93.89％)结果一致.结论:本文建立的核磁定量方法可用于帕瑞昔布钠的质量分数测定,该方法准确、快速,并为质量平衡法对标准物质定值提供有力佐证.

目的 采用HPLC法同时测定制剂中4种甜味剂(安赛蜜、糖精钠、阿司帕坦、甜菊苷)的含量.方法 采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm,5 μm),流动相A为0.02 mol·L-1磷酸二氢铵溶液(pH4.4),B为乙腈,梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,检测波长200 nm(糖精钠、阿司帕坦、甜菊苷)、226 nm(安赛蜜),柱温30 ℃,进样量10μL.结果 安赛蜜、糖精钠、阿司帕坦、甜菊苷均达到基线分离,分离度符合要求,各辅料均无干扰,线性范围分别为1.012～404.800 μg·mL-1(r=0.9999)、1.117～223.400 μg·mL-1(r=0.9999)、1.180～471.800 μg·mL-1(r=0.9997)、0.605～605.200 μg·mL-1(r=0.9999);检测限分别为 19.7、8.0、11.2、25.4 ng·mL-1;定量限分别为 65.7、26.0、37.5、84.7 ng·mL-1;平均加样回收率分别为 97.81％、98.30％、98.00％、101.10％,RSD 分别为 1.84％、1.39％、0.71％、1.98％(n=9).结论 所用方法稳定性、重复性均较好,通过测定甜味剂含量可监控制剂生产过程中辅料投料是否与处方一致,为儿童用药中甜味剂的质量控制提供了参考.

本研究通过建立一种水蛭特征肽质谱测定方法,对不同基原水蛭进行鉴别,为水蛭的鉴别与质量评价提供依据.将供试品进行提取及胰蛋白酶酶解,选择质荷比(m/z)601(双电荷)→630.35和m/z 601(双电荷)→743.44,m/z 475(三电荷)→588.76和m/z 475(三电荷)→662.30作为检测离子对,采用UPLC-MS/MS液质联用仪、Agilent ZORBAX SB C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以乙腈为流动相A,以0.1％甲酸水溶液为流动相B,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为30℃,进样量为2 μL.结果显示蚂蟥能检出水蛭多肽Ⅰ和水蛭多肽Ⅱ,柳叶蚂蟥只能检出水蛭多肽Ⅱ,水蛭只能检出水蛭多肽Ⅰ,故通过该质谱鉴别方法能区分蚂蟥、柳叶蚂蟥与水蛭三种不同基原.采用SIMCA-P 14.0软件对22批样品进行偏最小二乘法分析,可将不同基原水蛭归为三类.本研究所建立的方法专属性强、灵敏度高、重复性好,可用于区分不同基原的水蛭,提高其质量控制水平,为相关药品临床用药的安全性和有效性提供了参考依据.

目的 建立一种用于猴痘病毒(mpox virus)核酸检测的微液滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测方法.方法 设计靶向猴痘病毒F3L基因的特异性引物和探针,建立猴痘病毒核酸的ddPCR检测方法,对ddPCR的最适反应条件进行优化,并对ddPCR的特异性、灵敏度以及重复性进行检测.进一步对人脓拭子临床样本进行检测,对ddPCR方法检测临床样本的能力进行评价.结果 对ddPCR反应温度和引物探针浓度进行优化,建立猴痘病毒ddPCR检测方法,该方法最低检测限可达2拷贝/μl,与其他8种病毒无交叉反应.对10份人皮肤脓液拭子临床样本中的猴痘病毒进行检测,ddPCR方法检测到5份阳性样本,实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,qPCR)方法检测到4份阳性样本.结论 建立的猴痘病毒的ddPCR检测方法快速、特异、灵敏度高,用于临床样本中猴痘病毒检测.

目的 采用快速分子诊断方法中TaqMan荧光定量PCR技术,应用于利福平和异烟肼一线抗结核药物耐药基因的诊断中,评价其性能,建立高灵敏度、高特异度、高准确性并且快速的筛查方法,为结核分枝杆菌耐药性的诊断和治疗提供依据并探讨其应用价值,努力改善耐药结核病的检测和可行性.方法 本研究针对利福平ropB基因531位点突变和异烟肼katG基因315位点突变的特点,设计TaqMan-MGB引物和探针,通过反应条件优化,建立TaqMan荧光定量PCR方法;用克隆到pUC57载体上的阳性标准品及不同菌株评价该方法的特异性、灵敏度、重复性和精密度,采用甘油三酯、胆红素和血红素进行了干扰性实验.结果 TaqMan荧光定量PCR方法的检测限可达10copies/μl;在交叉干扰实验中,检测了 5种常见呼吸道感染细菌国家标准菌株,均未检出,基因野生型和突变型探针特异性较好,不受其它基因干扰;批内、批间的CT值变异系数均小于5％,标准曲线R2=0.998,扩增效率均在90％以上;该反应迅速,检测时间为1h.结论 本研究建立的TaqMan荧光定量PCR方法有助于及时发现结核分枝杆菌耐药情况,对结核病的耐药检测与后续治疗具有重要意义.

目的 采用HPLC法同时测定6种沙棘中的色胺类生物碱.方法 采用Xcharge-C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.15％三氟乙酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,检测波长280 nm,柱温30 ℃,进样量10 μL.结果 6 种色胺类生物碱的线性范围分别为 6.28～251.40、5.71～228.60、1.14～457.10、0.80～32.00、0.31～12.60、0.46～18.30μg·mL-1(r2＞0.9993);其中,供试品中共检测到4种色胺类生物碱,分别是5-羟色胺、6-hydroxy-l-methyltetrahydro-β-carboline-1-carboxylic acid、shepherdine、L-色氨酸;平均加样回收率分别为 93.63％、89.86％、91.58％、90.91％,RSD均＜3.00％.结论 所用方法简便、可靠、重复性好、结果准确.

目的 建立检测重组麻疹病毒载体严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom corona-virus 2,SARS-CoV-2)疫苗病毒滴度的荧光定量PCR(qPCR)法,并进行验证及初步应用.方法 以重组质粒pUC57-S351为模板,扩增SARS-CoV-2 S基因,优化引物浓度,建立qPCR检测方法.对该方法的专属性、重复性进行验证,确定线性范围及检测限.应用建立的qPCR法对生物反应器连续培养感染后1～12d的重组病毒S基因拷贝数进行检测.结果 选择引物浓度为0.20 μmol/L建立qPCR方法.该方法能特异性检测SARS-CoV-2 S基因拷贝数;模板浓度在2 × 102～2 × 108copies/μL之间,线性关系良好(R2=0.995),检测下限为2 × 102copies/μL;6次重复检测重组病毒S基因拷贝数的变异系数(coefficient of variation,CV)为2.64％.应用建立的qPCR法检测生物反应器连续培养感染后1～12d的重组病毒S基因拷贝数的结果与细胞病变法检测结果基本一致.结论 建立的qPCR法专属性和重复性良好,可用于重组麻疹病毒载体SARS-CoV-2疫苗病毒滴度检测.