目的:探讨葫芦巴碱对荷胆囊癌小鼠抑制作用及其机制。方法:胆囊癌细胞系SGC-996随机分为对照组、50 μmol/L组、150 μmol/L组，分别采用0、50、150 μmol/L葫芦巴碱处理细胞24 h，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析3组细胞活力；采用Transwell检测细胞迁移，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9 mRNA和蛋白质表达水平。采用胆囊癌细胞系SGC-996建立异体移植瘤模型随机分为模型组和葫芦巴碱组，葫芦巴碱组小鼠经腹腔给予葫芦巴碱50 mg/kg，模型组小鼠注射等体积生理盐水。连续治疗30 d，计算肿瘤体积和重量。计量数据比较采用 t检验。 结果:对照组胆管癌细胞吸光度值(1.94±0.21)明显高于50 μmol/L葫芦巴碱组(1.64±0.17)，差异有统计学意义( t＝3.091， P<0.05)。50 μmol/L葫芦巴碱组细胞吸光度值(1.64±017)明显高于150 μmol/L葫芦巴碱组胆管癌细胞(1.32±0.11)，差异有统计学意义( t＝2.784， P<0.05)。对照组胆管癌细胞迁移数量[(138.44±12.09)个]明显高于50 μmol/L葫芦巴碱组细胞[(109.37±9.33)个]，差异有统计学意义( t＝6.018， P<0.05)。50 μmol/L葫芦巴碱组细胞迁移数量[(109.37±9.33)个]明显高于150 μmol/L葫芦巴碱组胆管癌细胞[(79.36±7.81)个]，差异有统计学意义( t＝5.091， P<0.05)。对照组胆管癌细胞MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平(1.09±0.12、1.16±0.14)明显高于50 μmol/L葫芦巴碱组细胞(0.75±0.18、0.80±0.12)，差异有统计学意义( t＝4.115、4.001， P<0.05)。50 μmol/L葫芦巴碱组细胞MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平(0.75±0.18、0.80±0.12)明显高于150 μmol/L葫芦巴碱组(0.50±0.11、0.49±0.10)，差异有统计学意义( t＝3.819、3.618， P<0.05)。模型组治疗30 d后小鼠肿瘤体积[(1 542.49±254.88) cm 3]明显高于葫芦巴碱组[(1 127.38±142.29) cm 3]，差异有统计学意义( t＝6.099， P<0.05)。模型组治疗30 d后小鼠肿瘤质量[(5.29±0.41) g]明显高于葫芦巴碱组[(2.71±0.34) g]，差异有统计学意义( t＝4.971， P<0.05)。模型组治疗30 d后小鼠肿瘤组织MMP-3和MMP-9蛋白表达水平(2.39±0.14、1.52±0.16)明显高于葫芦巴碱组小鼠肿瘤组织(1.03±0.10、0.79±0.14)，差异有统计学意义( t＝3.901、3.428， P<0.05)。 结论:葫芦巴碱可显著下调MMP-2和MMP-9，抑制胆管癌细胞增殖和迁移，达到抗肿瘤作用。

目的:研究葫芦巴碱调节分化簇47(CD47)/信号调节蛋白α(SIRPα)信号通路对胃癌MGC803细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响.方法:以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测0、20、40、80、160、320 μmol/L的葫芦巴碱处理后的人胃癌细胞株MGC803存活率,筛选其最佳作用浓度.将体外培养的MGC803细胞随机分为对照组、葫芦巴碱组(160 μmol/L的葫芦巴碱处理)、CD47敲低组[转染CD47小干扰RNA(siRNA)质粒]、空载组(转染CD47空载质粒)、葫芦巴碱+CD47过表达组(160 μmol/L的葫芦巴碱干预处理+转染CD47过表达质粒),培养24 h后.采用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测各组细胞CD47/SIRPα通路表达;EdU染色和MTT法检测各组细胞增殖;流式细胞术检测各组细胞凋亡;免疫荧光染色检测各组细胞凋亡[B淋巴细胞瘤-2(Bel-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]相关蛋白表达;以不同细胞比例共培养人外周血单个核细胞与各组MGC803细胞后以MTT法检测人外周血单个核细胞对各组MGC803细胞的杀伤率;裸鼠体内移植瘤实验验证葫芦巴碱对CD47/SIRPα通路的调控作用.结果:20、40、80、160、320 μmol/L的葫芦巴碱均可降低MGC803细胞存活率(P＜0.05),且其降低作用随着葫芦巴碱浓度升高而增强,选择接近半抑制浓度值(168.94 μmol/L)的160μmol/L葫芦巴碱进行后续实验.与对照组比较,葫芦巴碱组、CD47敲低组细胞和移植瘤组织CD47、SIRPα mRNA及蛋白表达、EdU阳性率、存活率、Bcl-2相对荧光强度、移植瘤重量、移植瘤体积降低,凋亡率、Bax相对荧光强度、人外周血单个核细胞对MGC803细胞杀伤率升高(P＜0.05).与葫芦巴碱组比较,葫芦巴碱+CD47过表达组细胞和移植瘤组织CD47、SIRPα mRNA及蛋白表达、EdU阳性率、存活率、Bcl-2相对荧光强度、移植瘤重量、移植瘤体积升高,凋亡率、Bax相对荧光强度、人外周血单个核细胞对MGC803细胞杀伤率降低(P＜0.05).结论:葫芦巴碱可通过抑制CD47/SIRPα通路表达来抑制胃癌细胞增殖并诱导其凋亡,还可减轻其免疫逃逸.

目的 探讨葫芦巴碱联合有氧运动对高脂血症大鼠的影响及作用机制.方法 将SD大鼠随机分为对照组(正常饲料喂养)、模型组(高脂饲料喂养建立高脂血症大鼠模型)、低剂量实验组、高剂量实验组(高脂饲料+15、45 mg·kg-1的葫芦巴碱)、联合组(高脂饲料+45 mg·kg-1的葫芦巴碱+有氧运动),每组11只大鼠.用全自动生化分析仪检测血清脂质代谢相关指标;用酶联免疫吸附试验法检测血清6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)水平及肝组织谷草转氨酶(GOT)水平;用实时荧光定量聚合酶链反应法检测肝组织白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA水平;用蛋白质印迹法检测肝组织肝前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexin 9型(PCSK9)、低密度脂蛋白受体(LDLR)蛋白相对表达水平.结果 对照组、模型组、低剂量实验组、高剂量实验组、联合组大鼠血清总胆固醇(TC)水平分别为(1.81±0.10)、(6.68±0.77)、(5.10±0.44)、(3.57±0.47)和(2.40±0.35)mmol·L-1,6-keto-PGF1a 水平分别为(841.47±86.74)、(536.03±36.50)、(664.06±52.44)、(759.19±52.30)和(824.45±67.62)pg·mL-1,GOT水平分别为(11.95±0.88)、(18.20±1.81)、(15.05±1.10)、(13.32±0.98)和(12.47±0.83)U·L-1,IL-1β mRNA 表达水平分别为 1.00±0.09、2.21±0.17、1.57±0.10、1.26±0.16和1.14±0.09,PCSK9蛋白相对表达水平分别为0.39±0.07、0.88±0.08、0.71±0.08、0.60±0.04 和 0.52±0.07,LDLR 蛋白相对表达水平分别为 1.12±0.13、0.52±0.07、0.74±0.11、0.84±0.08 和0.96±0.11.模型组上述指标与对照组比较,低、高剂量实验组上述指标与模型组比较,联合组上述指标与高剂量实验组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 葫芦巴碱联合有氧运动可能通过抑制PCSK9表达,并上调LDLR表达改善脂代谢,从而对高脂血症大鼠发挥降脂作用.

目的 探讨葫芦巴碱对肾细胞癌细胞侵袭、迁移的影响及其可能的作用机制.方法 将786-O细胞分为:对照组、葫芦巴碱低(50 μmol/L)、高剂量组(150 μmol/L)、舒尼替尼组(2 μmol/L)、葫芦巴碱高剂量+脂多糖(LPS)组(150 μmol/L葫芦巴碱+1 μg/ml LPS);CCK-8法和平板克隆实验检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞侵袭;划痕实验检测细胞迁移;Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、核因子(NF)-κB-p65蛋白表达.以QNZ(NF-κB抑制剂)或SB-3CT(MMP-9抑制剂)与150 μmol/L葫芦巴碱共处理786-O细胞48 h以验证NF-κB/MMP-9通路上下游关系;将786-O细胞悬液皮下注射到裸鼠体内,30 d后,裸鼠分为裸鼠对照组、裸鼠葫芦巴碱低(25mg/kg)、高剂量组(50 mg/kg)、裸鼠舒尼替尼组(40 mg/kg)、裸鼠葫芦巴碱高剂量+LPS组(50 mg/kg葫芦巴碱+0.5 mg/kg LPS),给药4 w后,绘制肿瘤生长曲线,麻醉后处死裸鼠分离出肿瘤并称量肿瘤质量;免疫组化染色检测肿瘤中MMP-2、MMP-9蛋白.结果 与对照组比较,葫芦巴碱低、高剂量组及舒尼替尼组786-O细胞OD450值(24、48 h)、克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数及CyclinD1、MMP-2、MMP-9、NF-κB-p65蛋白表达降低,体内肿瘤体积和质量减小、肿瘤组织中MMP-2、MMP-9蛋白染色得分降低,且葫芦巴碱浓度越高,对应指标的降低趋势越明显(P＜0.05);而葫芦巴碱高剂量组与舒尼替尼组之间对应指标的变化差异无统计学意义(P＞0.05);LPS减弱了高剂量葫芦巴碱对786-O细胞增殖、侵袭、迁移及体内肿瘤生长的抑制作用.MMP-9为NF-κB通路下游分子.结论 葫芦巴碱抑制786-O细胞增殖、迁移、侵袭及体内肿瘤的生长的机制可能与抑制NF-κB/MMP-9通路有关.

目的 利用熵权法结合灰色关联度法对不同产地、品系枸杞子质量进行多指标综合评价.方法 测定 58 批样品中甜菜碱、葫芦巴碱、枸杞酸、玉米黄素双棕榈酸酯的含量,采用灰色关联度法,以熵权法所得权重为分辨系数建立品质评价模型.结果 各批样品相对关联度为 0.247～0.770,表明不同来源药材质量存在一定差异,其中甜菜碱含量为主要因素.宁夏产枸杞子综合质量较好,以舟塔地区最优,育化品种宁杞 7 号质量优于宁杞 1 号.结论 该方法可较好地反映枸杞子质量,为该药材品质评价和质量标准提升研究提供科学依据.

目的:建立鸡骨草胶囊HPLC指纹图谱,同时进行多个成分的含量测定.方法:采用Waters Atlantis T3 C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;利用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004 A版)"进行相似度评价,以 218、230 nm双波长测定 8 个成分的含量.结果:鸡骨草胶囊指纹图谱标定22 个共有峰,指认了 8 个成分,分别为 1 号葫芦巴碱、6 号京尼平苷酸、7 号京尼平-1-龙胆双糖苷、8 号绿原酸、10号京尼平苷、11 号维采宁-2、12 号芍药内酯苷、13 号芍药苷,10 批样品与对照图谱的相似度分别为 0.988、0.990、0.992、0.991、0.994、0.995、0.994、0.986、0.995、0.991;葫芦巴碱、绿原酸、维采宁-2、京尼平苷酸、京尼平-1-龙胆双糖苷、京尼平苷、芍药内酯苷、芍药苷平均加样回收率为 96.81%～101.30%,RSD为 1.85%～2.17%.结论:所建立的指纹图谱及多成分含量同时测定方法稳定、可靠、准确性较好,可用于鸡骨草胶囊质量控制及评价,为质量标准的提升及产品的二次开发提供了参考.

目的 采用LC-MS法结合化学计量学分析法探究不同发酵时间六神曲中葫芦巴碱、没食子酸、原儿茶酸、原儿茶醛、隐绿原酸、苦杏仁苷、香草酸、咖啡酸、芦丁、金丝桃苷、东莨菪内酯、阿魏酸、紫云英苷、槲皮素、槲皮苷、异绿原酸B、木犀草素、芹菜素的含量,并筛选差异性标志物.方法 该药物的分析采用Hypersil GOLDC18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9 μm);流动相乙腈-0.1％甲酸,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温30℃.采用主成分分析(PCA)对六神曲进行分类和评价,再借助正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)法筛选出差异性标志物,并通过聚类热图进行区分.结果 发酵过程中,葫芦巴碱、原儿茶醛、苦杏仁苷、芦丁、金丝桃苷、东莨菪内酯、紫云英苷质量分数呈下降趋势,没食子酸、原儿茶酸、香草酸、木犀草素、芹菜素质量分数呈上升趋势,隐绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、槲皮素、槲皮苷、异绿原酸B质量分数存在波动;PCA结果显示,不同发酵时间六神曲可聚类为4个发酵阶段;OPLS-DA结果表明,原儿茶酸、苦杏仁苷、金丝桃苷、东莨菪内酯、阿魏酸、异绿原酸B为差异性标志物;以18种已知化学成分、6个差异性标志物含量为指标,分别进行聚类热图分析,聚类结果一致.结论 该方法稳定可靠,可用于区分不同发酵时间六神曲.

目的 建立鸡骨草中葫芦巴碱纯化工艺及其质量分数测定的方法,分析不同产地鸡骨草根茎叶中葫芦巴碱质量分数分布情况,为鸡骨草质量评价和开发利用等提供依据.方法 以中性氧化铝为材料,采用柱吸附方法筛选葫芦巴碱最佳纯化工艺参数;采用HPLC法测定葫芦巴碱的质量分数,并对7批不同产地鸡骨草根茎叶中葫芦巴碱质量分数进行分析.结果 葫芦巴碱最佳纯化工艺为:量取质量浓度为0.02～0.04 g/mL鸡骨草提取液4 mL,上Al2 O3柱(5 g,干法装柱,直径1 cm,长20 cm),静置吸附15 min,加水15 mL洗脱,收集全部洗脱液,即得.不同产地鸡骨草根茎叶中葫芦巴碱质量分数为1.27～6.17 mg/g,分布各有所侧重,但分布趋势均是茎>叶>根.结论 本文方法简便快速、准确性和重复性好,可用于鸡骨草中葫芦巴碱质量分数测定和品质评价,对葫芦巴碱单体提制和开发利用具有指导价值.

目的:探讨葫芦巴碱对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响.方法:培养HepG2细胞,MTT法检测葫芦巴碱对HepG2细胞增殖的影响以确定可作用于HepG2细胞的葫芦巴碱的浓度;将HepG2细胞置于含胰岛素浓度为1×10-6mol/L的培养液中,培养36 h成功建立胰岛素抵抗模型后,每孔加入100 μL不同浓度的含药培养基,用葡萄糖检测试剂盒检测葫芦巴碱对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响.结果:葫芦巴碱浓度为3,000、2,500、2,000、1,500、1,000、500 μmol/L时的细胞存活率分别为21.38％、39.23％、51.43％、73.36％、86.23％、91.88％,葫芦巴碱浓度＞ 1,000 μmol/L时对细胞有明显的毒性,故选择终浓度为1,000、500、250、100、50、25 μM/L进行实验,各浓度葫芦巴碱对胰岛素抵抗的HepG2细胞的葡萄糖消耗分别为(4.679±0.04)、(3.994±0.062)、(3.683±0.094)、(3.633±0.120)、(3.619±0.119)、(3.503±0.128) μmol/L,其中,前两个浓度与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:葫芦巴碱对HepG2细胞胰岛素抵抗有改善作用.

耳鸣是严重影响人们生活质量的听觉系统疾病之一,随着环境及生活方式的改变,其发生率有逐年增加的趋势.咖啡是世界上饮用最广泛的功能性饮品之一,其对耳鸣的影响也逐渐得到关注.本文就咖啡及咖啡的主要成分(如咖啡因、葫芦巴碱等)与耳鸣的相关性研究进行综述.目前研究结果提示咖啡成分复杂,对耳鸣可能具有多重性的影响.