目的 研究阻断白细胞介素9(IL-9)对日本血吸虫(Sj)感染小鼠肝组织免疫损伤以及肠道菌群的影响,探讨阻断IL-9改善血吸虫病免疫病理损伤的机制.方法 将15只实验小鼠随机分成正常对照组、Sj组和IL-9阻断组.Sj组和IL-9阻断组小鼠分别感染(15±1)条日本血吸虫尾蚴,IL-9阻断组小鼠每周腹腔注射IL-9抗体2次,Sj组小鼠每周腹腔注射IgG抗体2次作为同型对照.感染9周后处死小鼠,收取肝脏组织进行苏木精-伊红(HE)染色、Masson染色及免疫组化;收取小鼠结肠内容物,对肠道微生物进行宏基因组测序.结果 HE、Masson染色显示,单个肉芽肿面积百分比,Sj组(58.6±4.9)%>IL-9阻断组(37.0±2.1)%,差异有统计学意义(F=678.4,P<0.001).胶原沉积面积百分比,Sj组(35.5±2.0)%>IL-9阻断组(16.2±0.3)%>正常对照组(0.4±0.1)%,差异有统计学意义(F=1 314.0,P<0.001).免疫组化染色显示,IL-9阻断后小鼠肝组织α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、胶原Ⅰ和胶原Ⅲ蛋白的表达水平显著降低.α-SMA蛋白表达百分比,Sj组(29.9±4.0)%>IL-9阻断组(14.9±1.4)%>正常对照组(1.4±0.4)%,差异有统计学意义(F=267.9,P<0.001);胶原Ⅰ蛋白表达百分比,Sj组(33.9±1.2)%>IL-9 阻断组(16.2±0.7)%>正常对照组(1.3±0.2)%,差异有统计学意义(F=3 112.0,P<0.001);胶原Ⅲ蛋白表达百分比,Sj组(14.5±3.0)%>IL-9阻断组(5.3±0.6)%>正常对照组(1.4±0.2)%,差异有统计学意义(F=131.1,P<0.001).小鼠肠道微生物宏基因组测序显示,与正常对照组比较,Sj组和IL-9阻断组小鼠肠道菌群的多样性和物种丰富度均降低,其中IL-9阻断组与正常对照组差异有统计学意义(P=0.002),温生菌、巴恩斯氏菌、未分类肠杆菌、埃希氏菌属等的丰度发生显著变化.结论 体内阻断IL-9可改变日本血吸虫感染小鼠肠道菌群的物种结构、多样性,并且这种改变可能与日本血吸虫病免疫病理的发生发展密切相关.

目的 研究日本血吸虫感染对小鼠肝脏铁分布及铁蛋白表达的影响.方法 24只昆明小鼠随机分为对照组、感染6、8、10周组,每组6只.感染组经腹部皮肤接种尾蚴(20±2)只,待小鼠染虫6、8、10周时,处死小鼠留取肝脏,采用苏木精-伊红(HE)染色和马松(Masson)染色观察小鼠肝脏病理变化,采用二氨基联苯胺(DAB)增强的普鲁士蓝(Perl's)铁染色观察肝组织铁分布,采用免疫组织化学染色检测肝脏铁蛋白的表达,采用逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测小鼠肝脏铁蛋白轻链和重链mRNA的表达.结果 与对照组小鼠比较,血吸虫感染6、8、10周组小鼠肝脏颜色逐渐变深,质地逐渐变硬.HE和Masson染色显示,感染组小鼠肝组织内有虫卵沉积,围绕虫卵形成肉芽肿及纤维化,而对照组未出现虫卵肉芽肿.DAB增强的Perl's铁染色显示,与对照组比较,感染6、8、10周组肝细胞铁染色强度降低,差异均有统计学意义(t=5.94、7.72、9.67,P均＜0.05),肝血窦内有铁色素沉积,且随感染时间延长逐渐增多(t=3.89、8.59、12.50,P均＜0.05),虫卵壳铁染色较强.免疫组织化学染色显示,感染6、8、10周组的肝脏铁蛋白表达均低于对照组(t=5.59、7.35、9.66,P均＜0.05),且随着感染时间延长逐渐减少.RT-qPCR结果显示,感染6、8、10周组的铁蛋白轻链和重链mRNA表达水平均低于对照组(t轻链=4.01、7.21、9.97,t重链=4.50、5.23、5.22,P均＜0.05).铁蛋白轻链mRNA随着感染时间的延长逐渐减少,与感染6周组比较,感染8周、10周组差异均有统计学意义(t=3.20、5.96,P均＜0.05).重链mRNA随着感染时间的延长无明显变化,感染6、8、10周组间差异均无统计学意义(t=0.73、0.72、0.01,P均＞0.05).结论 日本血吸虫感染可导致小鼠肝细胞铁含量减少,铁蛋白表达降低,这间接反映了血吸虫感染导致机体缺铁的状态,是血吸虫感染所致贫血的机制之一.

患者,女,45岁,农民,山东省菏泽人.2020年6-7月在河南务工期间,无明显诱因出现反复持续高热,就诊于当地manbet官网登录 ,经验性予左氧氟沙星、哌拉西林他唑巴坦等治疗,症状无好转.影像学检查示肝脏肿大,未见明显占位,肝脏穿刺活检组织病理,疑似寄生虫感染但未能鉴定虫种.8月12日转诊至山东第一医科大学附属消化病manbet官网登录 .入院查体:反复持续高热(最高体温达42 ℃),精神差;血常规示嗜酸粒细胞5.49×109/L↑,血红蛋白93 g/L ↓;粪样镜检未见寄生虫虫卵.患者有饮用生水、吃剩饭剩菜的习惯.居住环境卫生条件差,常有大鼠出入.捕获大鼠并解剖,可见大鼠肝脏表面有多灶黄色小斑片状及颗粒状肝损伤,病理切片可见肝脏实质大量虫卵聚集,另见成虫横断面.取患者血样,ELISA检测血清抗体,结果示仅抗旋毛虫抗体呈弱阳性.腹部B超示肝脏肿大,密度欠均匀.调取外院肝脏穿刺组织病理切片复阅,于肝实质内查见数灶少量寄生虫卵,周围淋巴细胞及大量嗜酸粒细胞浸润,局部可见多核巨噬细胞吞噬虫卵形成的肉芽肿性炎.患者肝组织中的虫卵和大鼠肝组织中的虫卵形态相同,经鉴定均为肝毛细线虫虫卵.予口服阿苯达唑片20 mg/(kg·d),72h后体温降至正常范围,服药7d后,无明显不适,出院.1个月后患者回manbet官网登录 随访,未再出现发热症状,恢复良好.

目的 构建经门静脉直接注射日本血吸虫虫卵诱导血吸虫肝病小鼠模型并评价其效果,为血吸虫肝病研究提供新的动物模型.方法 将15只8周龄的C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和注射虫卵组,其中对照组5只,注射虫卵组10只.第-14天将5 000个活虫卵注射至小鼠腹腔,第0天麻醉小鼠后剖开腹腔,经门静脉注入5 000个虫卵,对照组注射等体积的磷酸盐缓冲盐溶液(PBS).分别于第10天、第30天处死虫卵组小鼠各5只,第10天处死对照组小鼠,收集小鼠血清和肝组织,通过进行苏木素-伊红染色(HE染色)、马松染色(Masson染色),微孔板分光光度计法检测丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、肝脏羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量,以及实时荧光定量PCR(qPCR)法检测肝纤维化相关基因、Th1和Th2型免疫反应相关基因,分析肝损伤、虫卵肉芽肿和纤维化以及适应性免疫反应等指标,评价经门静脉注射虫卵诱导血吸虫肝病小鼠模型的效果.结果 经门静脉注射虫卵10d和30d后,小鼠肝脏出现明显的虫卵肉芽肿,第10天组虫卵肉芽肿面积与第30天组相比,差异无统计学意义(t=0.975,P=0.332).Masson染色和肝脏羟脯氨酸含量检测显示肝脏发生明显纤维化.qPCR结果表明,与对照组相比,第10天组小鼠肝组织纤维化标志基因α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-Sma)、Ⅰ 型胶原(collagen type Ⅰ alpha 1,Col1 α1)、转化生长因子 β1(transforming growth factor beta 1,Tgfb1)表达水平显著升高,差异有统计学意义(t=6.380、7.533、5.314,P=0.002、0.001、0.007);在第30天时出明显下降,与对照组相比差异无统计学意义(t=0.940、1.529、1.746,P=0.778、0.543、0.457).同时,Th1型免疫反应相关基因肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,Tnf)、干扰素-γ(interferon gamma,Ifng)和 Th2 型免疫反应相关基因白细胞介素 5(interleu-kin-5,Il5)、白细胞介素 13(interleukin-13,Il13)表达水平在注射虫卵10 d后显著升高,差异有统计学意义(t=6.163、4.589、5.651、5.367,P=0.003、0.018、0.020、0.009).此外,各组小鼠血清中的AST、ALT水平无明显变化,差异无统计学意义(t=0.982、3.450,P=0.771、0.074;t=1.164、0.564,P=0.697、0.917).结论 经门静脉注射虫卵诱导血吸虫肝病小鼠模型构建成,研究结果为血吸虫病肝纤维化的机制研究提供了新的建模方法.

目的 初步探讨miR-155/SOCS1协同IL-17在日本血吸虫(Schistosoma japonicum)感染早期病程进展中的作用.方法 BALB/c小鼠腹部经皮感染日本血吸虫尾蚴,分别于第8、14周活杀小鼠,分析小鼠体质量及脾指数的变化,H&E染色观察肝病理形态,实时定量PCR检测miR-155及细胞因子信号抑制蛋白1(SOCS1)的mRNA表达,ELISA检测血清IL-17含量.结果 小鼠感染后一般状况差,体质量减轻,脾明显肿大致脾指数显著升高,感染8周肝组织开始有虫卵沉积,伴大量炎性细胞浸润,出现明显的肉芽肿和纤维化病变,模型鼠肝炎症程度随感染进展减轻,肉芽肿减少.血吸虫感染后miR-155的基因表达和血清IL-17含量明显增加,感染14周显著下降但仍高于正常对照组,而SOCS1的mRNA表达持续增加.结论 miR-155可能协同IL-17促进血吸虫感染早期的炎症免疫反应,通过负调控SOCS1参与血吸虫感染的病程进展.

血吸虫病是一种广泛流行于热带及亚热带地区可引起人畜共患的寄生虫病,其危害仅次于疟疾.中国是日本血吸虫病的主要流行国家之一.血吸虫病肝纤维化的病理基础是宿主对虫卵可溶性抗原(SEA)的持续刺激引起的免疫应答反应,导致以虫卵肉芽肿、组织损伤等为主要特征的慢性炎症发生,最终引起肝纤维化,严重可导致死亡.本文从细胞水平(Th2细胞、肝星状细胞、肝巨噬细胞、其他免疫细胞)、细胞因子及关键信号通路(IL-13/STAT6IL-13、TGF-β1/smads、IL-17、IFN-γ、其他通路)、microRNA的调控作用等方面对血吸虫病肝纤维化及其致病机制进行了综述.

目的 以2种日本血吸虫易感小鼠为动物模型, 探讨日本血吸虫 (Schistosoma japonicum, S.j) 童虫细胞免疫母鼠的子代鼠抗日本血吸虫攻击感染的应答水平.方法 用S.j童虫细胞分别免疫昆明母鼠和Balb/c母鼠, 将免疫母鼠或正常母鼠与相应鼠种的正常公鼠进行配对饲养, 用其子代鼠建立2个感染模型共4组 (A1:免疫昆明子代感染组;B1:正常昆明子代感染对照组;A2:免疫Balb/c子代感染组;B2:正常Balb/c子代感染对照组);计数A1、B1、A2、B2组经日本血吸虫尾蚴攻击感染后从其子代鼠体内收获的虫荷和每克肝卵荷 (liver eggs per gram, LEPG);测量上述4组小鼠经HE染色后的肝组织切片内虫卵肉芽肿的大小;间接ELISA检测血清中抗S.j可溶性童虫抗原 (soluble juvenile worm antigens, SJWA) IgG (H+L) 水平.结果 与正常昆明株、Balb/c株子代对照组B1、B2组相比, 2组S.j童虫活细胞免疫母鼠子代A1、A2组均表现出不同程度的抗攻击感染的免疫力, 尤其抗生殖效果显得尤为突出.其中, A1获得35.6％的减虫率和59.4％的LEPG减卵率;A2获得29.8％的减虫率和47.4％的LEPG减少率.从肝脏外表来看, B1、B2组子代对照鼠肝脏的坏死程度明显高于A1、A2免疫子代鼠.此外, A1组肝脏虫卵肉芽肿平均直径和面积比B1组分别减少23.8％和43.4％, A2组肝脏虫卵肉芽肿平均直径和面积较B2组减少28.4％和50.3％.A1、A2与B1、B2各指标结果的组间差异均具有统计学意义 (P＜0.05) .间接ELISA结果显示, 不同时间点采集的2株免疫子代鼠血清中的抗SJWA-IgG水平高于同期相应对照组血清中的特异性IgG水平.结论 用S.j童虫细胞接种母鼠所诱生的保护性免疫能传给子代, 进而使子代鼠产生针对后天初次感染的保护性免疫.

目的 观察pVAX1/IL-18联合pVAX1/SjRPS4oCB多价疫苗诱导免疫对小鼠肝脏虫卵肉芽肿形成的影响.方法 70只雌性小鼠随机分为NS组、pVAX1空质粒组、pVAX1/IL-18组、pVAX1/SjRPS4oCB组和pVAX1/SjRPS4oCB+ pVAX1/IL-18组,每组小鼠注射相应质粒100 μg或等量生理盐水,每隔2周加强免疫1次,共3次.末次免疫后3周,用血吸虫尾蚴以腹部贴片感染小鼠.感染后第8周剖杀小鼠,取肝组织做石蜡切片,HE染色及Masson染色后光镜下观察肝脏虫卯肉芽肿大小及虫卵周围胶原沉积情况,计算肝组织减卵率. 结果 与对照组相比,pVAX1/SjRPS4oCB+ pVAX1/IL-18组小鼠肝脏病变程度较轻,表面虫卵结节较少,肝脏色泽、质地等接近正常肝脏,虫卵肉芽肿数量及肉芽肿面积均下降,虫卵肉芽肿周围胶原含量减少;肝减卵效果显著,减卵率为63.00％,与其它各组27.00％～52.00％比较差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 IL-18联合pVAX1/SjRPS40CB疫苗具有抑制抑制肝脏血吸虫虫卵肉芽肿的效果.

目的 优化日本血吸虫感染小鼠肝脏肉芽肿细胞的分离方法,以获得足量和纯净的肉芽肿活细胞,流武检测确定细胞的分离效果.方法 血吸虫尾蚴经皮感染C57BL/6小鼠,于感染后6周、12周剖杀小鼠,取肝脏,采用Ⅳ型胶原酶两步消化法分离肉芽肿细胞,并对胶原酶浓度及消化时间进行探索;进行流式检测,分析粒细胞、淋巴细胞和CD4+T的分离效果.结果 感染6周小鼠肝脏的Ⅳ型胶原酶最佳浓度为0.25 mg/mL,最佳消化时间为30 min(第一步)和30 min(第二步),流式细胞仪检测该条件可获得较高比例CD4+T细胞;而感染12周小鼠的肝脏,Ⅳ型胶原酶最佳浓度为0.3 mg/mL,消化时间分别为40、30 min,流式检测此条件可获得更高比例的CD4+T细胞.结论 急慢性肝脏肉芽肿细胞的分离所需Ⅳ型胶原酶的浓度不同;采用本研究优化的胶原酶两步消化法可获得大量、纯净的肉芽肿活细胞,并且细胞表面标志保存完好,为研究日本血吸虫肝脏肉芽肿的细胞机制提供重要材料.

目的 检测亚洲日月蛤多糖的分子特性,探讨其在干预小鼠日本血吸虫肝纤维化中的作用.方法 提取并纯化亚洲日月蛤多糖,采用凝胶排阻法对其分子量进行测定,应用PMP柱前衍生法对其单糖组成进行检测.取50只雌性BALB/c小鼠,随机分成5组,每组10只小鼠.A组给予生理盐水灌胃,B、C、D、E组小鼠分别经腹部皮肤攻击感染血吸虫尾蚴(30±2)条/只;饲养第8周末,C、D、E组小鼠分别给予多糖、吡喹酮及多糖+吡喹酮治疗,B组小鼠给予生理盐水;第16周末,收集小鼠肝脏及血清,通过HE染色观察小鼠肝脏虫卵肉芽肿病变及肝纤维化情况,采用ELISA法检测血清IFN-γ、IL-13水平.结果 亚洲日月蛤多糖相对分子量为11.7 kDa,其多糖主要由葡萄糖组成.C、D组和E组小鼠血清IFN-γ浓度显著高于对照组(F=63.525,P<0.01),C、D组和E组小鼠血清IL-13浓度显著低于B组(F=99.788,P<0.01).HE染色显示,B、C、D、E组小鼠肝组织均见不同程度虫卵结节和纤维化改变,A组小鼠肝脏正常,E组虫卵结节较B组少(c2=7.875,P<0.05).结论 亚洲日月蛤多糖具有明显的抗日本血吸虫肝纤维化作用,与吡喹酮联用效果更好.