目的:制备靶向转铁蛋白受体（TfR）的多肽分子探针 99Tc m-组氨酸-精氨酸-脯氨酸-酪氨酸-异亮氨酸-丙氨酸-组氨酸（简称 99Tc m-T7），并评估其在荷瘤裸鼠模型micro SPECT/CT显像中的效果。 方法:采用间接标记法，在共配体N-三（羟甲基）甲基甘氨酸和乙二胺二乙酸的协同下，制备 99Tc m-T7。采用流式细胞术测定人胰腺癌PANC-1细胞和人乳腺癌MX-1细胞表面TfR的表达水平，采用体外细胞结合及细胞竞争抑制实验评估 99Tc m-T7体外结合TfR的亲合力及特异性。构建荷瘤裸鼠模型，注射 99Tc m-T7后进行micro SPECT/CT显像及生物学分布实验。采用离体组织放射性磷屏自显影成像及组织病理学检查，观察TfR的表达情况。2组间的比较采用独立样本 t检验。 结果:成功制备了分子探针 99Tc m-T7，其标记率>95%，分别在与生理盐水、胎牛血清的混合液中孵育4 h后的放射化学纯度为（95.3±0.3）%和（90.6±0.4）%。流式细胞术实验结果显示，PANC-1细胞与TfR单克隆抗体的结合率为（98.9±0.1）%，而MX-1细胞与TfR单克隆抗体的结合率为（0.2±0.1）%。体外细胞结合实验结果表明，PANC-1细胞与 99Tc m-T7共孵育60 min后结合率达到峰值[(16.12±0.01)%]，高于MX-1细胞[（1.20±0.01）%]，且二者间的差异有统计学意义（ t=28.67， P<0.001）；细胞竞争抑制实验结果表明，PANC-1阻断组与 99Tc m-T7的结合率降低至（2.40±0.01）%，与PANC-1实验组的差异有统计学意义（ t=26.91， P<0.001）。荷瘤裸鼠体内micro SPECT/CT显像结果显示， 99Tc m-T7可从血液中迅速清除，主要通过肾脏排泄。PANC-1荷瘤裸鼠模型在注射 99Tc m-T7后30 min时肿瘤轮廓显示清晰，肿瘤/肌肉比值达2.80±0.22。生物学分布实验结果显示，肿瘤及各脏器对 99Tc m-T7的摄取[每克组织百分注射剂量率（%ID/g）]与显像结果一致，且 99Tc m-T7在PANC-1细胞中的摄取[（0.55±0.18）%ID/g]高于MX-1细胞[（0.16±0.11）%ID/g]，差异有统计学意义（ t=6.42， P<0.001）。放射性磷屏自显影结果显示，在注射 99Tc m-T7 30 min后，相较于MX-1细胞，PANC-1细胞显著摄取 99Tc m-T7 ；在正常组织脏器中，以肾脏摄取最为显著，其次为肝脏。苏木精-伊红染色法及免疫组织化学染色法结果显示，肿瘤实质内未见明显坏死，在PANC-1细胞中TfR呈高表达，而在MX-1细胞中TfR呈低表达。 结论:成功制备了靶向TfR的特异性多肽分子探针 99Tc m-T7，其在荷瘤裸鼠模型中具有良好的显像效能，有望为在体监测肿瘤TfR的表达提供新的影像学手段。

目的 研究转铁蛋白靶向肽T7(7pep)对聚乙二醇-聚己内酯(PEG-PCL)胶束在人宫颈癌HeLa细胞内转运行为的影响.方法 以香豆素-6(C6)为荧光指示探针,通过薄膜分散法制备包载有C6的PEG-PCL(PEG-PCL-C6)胶束以及靶头7pep修饰的PEG-PCL(7pep-PEG-PCL-C6)胶束.比较两种胶束的粒径、多分散指数及外观形态;比较两种胶束被HeLa细胞实时摄取的情况及其入胞后与早期内吞体(EE)、内吞循环室(ERC)、晚期内吞体(LE)的共定位情况.结果 PEG-PCL-C6和7pep-PEG-PCL-C6胶束的平均粒径分别为(75.0±2.3)、(82.0±1.5)nm,多分散指数分别为0.17±0.20、0.17±0.32,外观均为规整的圆球形.7pep-PEG-PCL-C6胶束的入胞速度和入胞量均明显快/多于PEG-PCL-C6胶束.7pep-PEG-PCL-C6胶束比PEG-PCL-C6胶束能够更快地进入EE,而入胞后PEG-PCL-C6胶束进入ERC的速率较7pep-PEG-PCL-C6胶束快,且PEG-PCL-C6胶束和7pep-PEG-PCL-C6胶束在LE均有逐渐累积的趋势,但7pep-PEG-PCL-C6胶束入胞60 min时与LE的皮尔森系数、信号重叠比率、共定位比率均显著低于入胞30 min时(P＜0.05或P＜0.01).结论 靶头7pep修饰可提高PEG-PCL-C6胶束的入胞速率和入胞量,还可改变其胞内转运行为.

目的 合成具有肿瘤靶向作用、穿膜能力和药物载体功能的嵌合肽T7-R8,制备安全有效的T7-R8/pTRAIL纳米复合物,初步研究其对小鼠黑色素瘤B16F10细胞的增殖抑制作用.方法 采用标准固相合成法合成多功能嵌合肽T7-R8,共孵育法制备T7-R8/pTRAIL纳米复合物,并对其理化性质进行评价,用流式细胞仪检测细胞转染效率,用CCK-8法检测抑制黑色素瘤细胞增殖的能力.结果 当T7-R8/pTRAIL质量比≥10时,带正电的T7-R8载体可以完全压缩pTRAIL形成稳定的纳米复合物,选择最佳质量比(WT7-R8/WpTRAIL= 20∶1)用于抗黑色素瘤增殖实验,经过T7肽修饰后,发现T7-R8/pTRAIL纳米复合物对黑色素瘤增殖抑制作用强于R8/pTRAIL纳米粒(P＜0.05).结论 T7-R8/pTRAIL纳米复合物可能是一种高选择性、高效的抗黑色素瘤给药系统,为后续的治疗研究提供新的思路.

目的 探讨补肾活血方对铁过载小鼠前脂肪细胞株(3T3-L1)成脂分化功能的影响及作用机制.方法 连续7 d给45只SD大鼠灌胃补肾活血方(15 g/kg)以制备补肾活血方含药血清.将3T3-L1细胞分为正常对照组、空载体对照组、模型组、铁过载组、Nrf2基因沉默组.采用3T3-L1细胞,使用慢病毒颗粒转染构建核因子E2相关因子-2(Nrf2)基因沉默3T3-L1细胞(3T3-L1 shNrf2)与空载体对照3T3-L1细胞(3T3-L1 shCtrl).使用柠檬酸铁铵(FAC)构建3T3-L1铁过载细胞模型,并筛选出最优浓度.正常对照组与空载体对照组不予干预,模型组给予FAC,铁过载组和Nrf2基因沉默组给予FAC+补肾活血方含药血清.采用CCK-8法、油红O染色法分别检测各组细胞的存活率及脂质沉积情况.采用实时荧光PCR法检测过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)、激素敏感脂肪酶(HSL)、脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)mRNA的表达量.采用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测细胞上清液中还原型谷胱甘肽(GSH)和脂质过氧化物(LPO)的含量.采用蛋白质印迹法检测转铁蛋白受体(TFR)、铁蛋白轻链(FTL)、铁蛋白重链(FTH)、铁调节蛋白(IRP)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、胱氨酸/谷氨酸反向转运体(XCT)、血红素氧合酶1(HO-1)、Nrf2的蛋白表达量.结果 与空载体对照组比较,Nrf2基因沉默组中3T3-L1细胞的Nrf2的表达水平降低(P<0.01),表明3T3-L1 shNrf2构建成功.并确定15μmol/L为FAC的最优浓度.与空载体对照组比较,模型组的细胞存活率降低(P<0.01),甘油三酯相对含量增加(P<0.01)、细胞内脂质沉积增加,PPARγ、HSL和ATGL mRNA的表达量均降低(P<0.01),GSH和LPO含量均降低(P<0.01),Nrf2、IRP的蛋白表达量均增加(P<0.05,P<0.01),TFR、FTL、GPX4、XCT、FTH、HO-1的蛋白表达量均降低(P<0.01).与模型组比较,铁过载组的细胞存活率增加(P<0.05),甘油三酯相对含量降低(P<0.01)、细胞内脂质沉积降低,P P ARγ、HSL和ATGL mRNA的表达量均增加(P<0.05),GSH和LPO含量增加(P<0.05),IRP蛋白表达量降低(P<0.05),Nrf2、TFR、FTL、GPX4、XCT、FTH、HO-1蛋白表达量均增加(P<0.05,P<0.01).与铁过载组比较,Nrf2基因沉默组的细胞存活率降低(P<0.05),甘油三酯相对含量增加(P<0.05)、细胞内脂质沉积增加,PPARγ、HSL和ATGL mRNA的表达量均降低(P<0.05),GSH和LPO含量均降低(P<0.05),IRP蛋白表达量增加(P<0.05),Nrf2、TFR、FTL、GPX4、XCT、FTH、HO-1蛋白表达量均降低(P<0.05,P<0.01).结论 补肾活血方可以有效保护3 T3-L1细胞免受铁过载诱导的氧自由基损伤与细胞铁死亡,有利于脂肪细胞的增殖,并且可以抑制其终末成熟.