目的:探讨构建自交联重组胶原蛋白水凝胶的可行性及其对紫外线诱导的光老化模型修复作用。方法:2023年3—12月，于西北大学陕西省可降解生物医学材料重点实验室，使用不同浓度的重组胶原蛋白通过自交联制备重组胶原蛋白水凝胶，表征了水凝胶材料的物理机械性能，用MTT法、溶血试验检测水凝胶生物相容性；建立人皮肤成纤维细胞光老化模型，通过RT-qPCR检测炎症因子及ECM生成、降解相关基因表达量探究水凝胶分子水平改善光老化效果。建立紫外照射小鼠光老化模型，通过大体观察以评估水凝胶改善光老化效果，通过HE染色观察水凝胶的组织兼容性和降解性，通过RT-qPCR及免疫荧光染色探讨水凝胶作用机制。结果:4 mg/ml、20 mg/ml和40 mg/ml的GEL-Ⅰ水凝胶均表现出良好的物理机械性能。生物相容性研究显示不同浓度的水凝胶细胞存活率>100%，具有促细胞增殖作用，且与重组Ⅰ型胶原蛋白的浓度呈正相关；3组水凝胶溶血率均<5%。qPCR显示HSF光老化模型中，与模型组相比，3个浓度的水凝胶组细胞中Bcl-2和TGF-β1显著升高( P<0.05)，Caspase-3和Caspase-9显著下调( P<0.05)，细胞凋亡程度显著降低。MMP-9基因水平下调( P<0.05)，Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和Vimentin基因显著上调( P<0.05)。光老化小鼠模型中，与模型组相比，水凝胶组的小鼠皮肤形成的皱纹更少。HE染色显示胶原蛋白纤维表达量丰富且紧密、角质层更加光滑；与模型组相比，GEL-Ⅰ能更好地降低活性氧含量，提高SOD活性，降低MDA表达( P<0.05)，且呈浓度依赖性趋势，40 mg/ml组与对照组相比活性氧、SOD水平差异有统计学意义( P<0.05)；天狼猩红染色显示水凝胶组组织中胶原蛋白含量显著增加( P<0.05)，40 mg/ml组与对照组相比胶原含量显著增加( P<0.05)；免疫荧光染色显示肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、基质金属蛋白酶-9含量呈显著下降( P<0.05)，且呈浓度依赖性。 结论:重组Ⅰ型胶原水凝胶可改善氧化应激和炎症微环境，降低皮肤组织活性氧，下调促HSF凋亡细胞因子和基质金属肽酶9，促进皮肤光老化细胞的功能恢复，提升细胞外基质成分表达，可有效改善光损伤皮肤。

目的:建立放射性心脏纤维化大鼠模型，观察重组人血管内皮抑制素(恩度)对心肌纤维化的影响，初探转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)与心肌纤维化的相关性。方法:将40只SD大鼠按随机数表法分为4组，每组10只，A组为健康对照组；B组为恩度干预组，恩度(6 mg/kg)腹腔连续注射14 d；C组为单纯照射组，心脏照射25 Gy/5次，连续5 d；D组为照射＋恩度干预组，恩度给药方法同B组、心脏照射方法同C组。照射后第1、3个月各麻醉处死5只大鼠。Masson染色评估心肌纤维化情况，Western blot检测心肌TGF-β1、CTGF及胶原蛋白Ⅰ(COL－Ⅰ)型表达。结果:照射后1和3个月，B组未见明显的心肌纤维化表现，C组和D组可见胶原纤维分布于心肌细胞间质。照射后1个月，半定量分析结果显示A组的心肌胶原容积分数(CVF)为(5.20±0.75)%，C组(10.12±2.17)%和D组(10.32±1.36)均高于A组( t＝4.74、4.93， P<0.01)，C组和D组的CVF差异无统计学意义( P>0.05)；照射后3个月C组的CVF(13.17±2.67)%仍比A组(5.23±1.32)%高( t＝4.49， P<0.01)，C组的CVF低于D组(16.92±3.58)%( t＝3.19， P<0.05)。照射后1个月，A组TGF-β1的表达量为0.441±0.063，C组0.817±0.079高于A组( t＝5.81， P<0.01)；照射后3个月，A组TGF-β1的表达量为0.501±0.110，C组0.832±0.150高于A组( t＝4.19， P<0.01)，D组1.403±0.133高于C组( t＝7.24， P<0.01)。照射后1、3个月，各组间CTGF及COL-I的变化趋势与TGF-β1的变化趋势相似。 结论:射线可引起心肌纤维化的形成，重组人血管内皮抑制素可能会加重晚期放射纤维化的形成。

目的:观察氧化应激条件下骨形成蛋白4（BMP4）对人视网膜微血管内皮细胞（hRMEC）的增生和迁移影响。方法:将体外培养的hRMEC分为对照组、4-羟基壬烯醛（HNE）处理组（4-HNE组）、4-HNE+BMP4处理组（BMP4组）。4-HNE组细胞培养基加入10 μmmol/L 4-HNE；BMP4组细胞培养基加入10 μmmol/L 4-HNE刺激6 h后，再加入100 ng/ml重组人BMP4。噻唑蓝比色法检测4-HNE、BMP4对hRMEC生存力的影响。细胞划痕实验测定4-HNE、BMP4对细胞迁移能力的影响。实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测对照组、4-HNE组细胞中BMP4 mRNA相对表达量以及对照组、BMP4组细胞中纤维连接蛋白（FN）、层粘连蛋白（Laminin）、α-平滑肌收缩蛋白（α-SMA）、胶原蛋白Ⅰ型（Collagen Ⅰ）、血管内皮生长因子（VEGF）、结缔组织生长因子（CTGF）mRNA相对表达量。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测对照组、4-HNE组细胞中BMP4蛋白相对表达量。两组间比较采用 t检验。 结果:与对照组比较，4-HNE组、BMP4组细胞生存力（ t=12.73、16.26， P=0.000 2、<0.000 1）、细胞迁移率（ t=28.17、37.48， P<0.000 1、<0.000 1）均明显提高，差异有统计学意义；4-HNE组细胞中BMP4 mRNA、蛋白相对表达量明显升高，差异有统计学意义（ t=16.36、69.35， P=0.000 1、<0.000 1）。qRT-PCR检测结果显示，与对照组比较，BMP4组细胞中VEGF、FN、Laminin、α-SMA、Collagen Ⅰ、CTGF mRNA相对表达量明显升高，差异有统计学意义（ t=10.61、17.00、14.85、7.78、12.02、10.61， P=0.0004、<0.000 1、0.000 1、0.001 5、0.000 1、0.000 4）。 结论:BMP4可诱导hRMEC的增生和迁移，并可调控hRMEC中血管生成因子和纤维化相关因子表达。

目的:基于生物信息学的方法分析胃癌的基因表达谱，探讨可能参与胃癌发生发展及影响其预后的差异表达基因(DEGS)。方法:从基因表达综合数据库(GEO)数据库下载3个mRNA芯片数据集GSE33651、GSE54129和GSE118916进行分析，获得基因表达谱，以差异倍数[|log Fc(foldchange)|]>1、校正后 P值(adj P)<0.05作为标准筛选差异基因，然后应用在线工具维恩图(venn)获得3个数据集的共有差异基因，获得192个上调基因和65个下调基因。通过STRING和Cytoscape构建了DEGs的蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络，筛选分值最高的10个差异基因为关键基因。京东基因组百科全书(KEGG)和基因本体论(GO)用于功能富集分析。使用GEPIA、Oncomine和Kaplan-Meier在线网站来分析核心基因的表达和总体生存率(OS)，以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:通过3个数据集交集获得257个DEGs，其中包括192个上调基因和65个下调基因，这些基因生物学功能主要富集在糖衍生物结合、受体结合及大分子络合物结合，主要参与局部粘连、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路及细胞外基质受体相互作用的调节。在PPI网络中筛选出10个关键基因，Kaplan-Meier生存曲线显示，在胃癌患者中纤维连接蛋白1(FN1)、细胞表面跨膜糖蛋白分子44(CD44)、α1-Ⅰ型胶原基因(COL1A1)、α2-Ⅰ型胶原基因(COL1A2)、整联蛋白αM(ITGAM)、基质金属肽酶-2(MMP-2)、整联蛋白β2(ITGB2)高表达与更差预后明显相关，而重组人趋化因子8(CXCL8)高表达与更好预后相关。其中，FN1、COL1A1、CD44、COL1A2、ITGB2和CXCL8均在胃癌组织中高表达。结论:FN1、COL1A1、CD44、COL1A2、ITGB2与胃癌的发生及预后明显相关。

目的:观察微小RNA(miR)-23a-3p通过调控Runx2基因对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法:绝经后骨质疏松症(PMOP)患者及正常的女性志愿者各30例，检测两组血清中miR-23a-3p表达水平。建立雌性小鼠骨质疏松模型后提取BMSCs，将miR-23a-3p inhibitor和miR-阴性对照(NC)分别转染入BMSCs，检测miR-23a-3p表达水平，同时检测成骨基因Runx2、骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)信使RNA(mRNA)，酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测细胞内碱性磷酸酶(ALP)含量。培养HEK293细胞，将miR-23a-3p模拟物和miR-NC分别于野生型Runx2 3’端非编码区(3’UTR)(WT)或突变型Runx2 3’UTR(Mut)重组质粒共转染，使用双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性。最后将miR-23a-3p inhibitor和miR-23a-3p inhibitor+siRunx2分别转染入BMSCs，检测Runx2蛋白、OCN、Collagen Ⅰ mRNA含量及ALP含量，两样本两组间比较采用 t检验。 结果:PMOP患者血清中miR-23a-3p表达量高于对照组(0.872±0.307比0.382±0.183， t＝7.514， P<0.05)。转染miR-23a-3p inhibitor的BMSCs中miR-23a-3p表达量低于转染miR-NC组(0.480±0.045比1.361±0.113， t＝-16.213， P<0.05)，差异有统计学意义。转染miR-23a-3p inhibitor的BMSCs中Runx2蛋白、OCN、Collagen Ⅰ mRNA表达量及ALP含量高于转染miR-NC组[0.608±0.065比0.234±0.041，0.523±0.053比0.229±0.046，0.652±0.060比0.381±0.030，(5.569±0.377) U/L比(2.513±0.308) U/L， t＝9.409、9.036、10.846、14.036， P<0.05]，差异有统计学意义。生物信息学分析及双荧光素酶报告基因检测进一步证实了Runx2是miR-23a-3p的直接靶点。转染miR-23a-3p inhibitor+siRunx2的BMSCs中Runx2蛋白、OCN、Collagen Ⅰ mRNA表达量及ALP含量低于转染miR-23a-3p inhibitor组[0.373±0.051比0.600±0.083，0.321±0.015比0.645±0.030，0.417±0.027比0.617±0.065，(3.733±0.056) U/L比(6.751±0.091) U/L， t＝5.188、21.491、6.414、63.040， P<0.05]，差异有统计学意义。 结论:miR-23a-3p通过负调控Runx2基因的表达抑制BMSCs成骨分化。

目的:确定问号钩端螺旋体vWF-A基因产物结合人胶原蛋白的作用与机制。方法:采用生物信息学软件分析问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株vWF-A基因(LA_0012、LA_0697和LA_4207)产物结构与功能。构建上述基因vWF-A功能结构域片段原核表达系统，采用SDS-PAGE和Ni-NTA亲和层析法检查目的重组蛋白rLep0012、rLep0697和rLep4207表达情况和提纯效果。采用ELISA和表面等离子共振法(SPR)检测目的重组蛋白与人Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅵ型胶原蛋白(hCOL1/3/4/6)的结合能力。采用实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测问号钩端螺旋体赖株感染人和小鼠血管内皮细胞(HUVEC和EOMA)时vWF-A基因转录和表达水平变化。结果:vWF-A基因产物均为含vWF-A超家族结构域表面或跨膜蛋白，但LA_0697和LA_4207基因还含有金属离子依赖性黏附位点(MIDAS)。所构建的原核表达系统能有效表达目的重组蛋白，Ni-NTA亲和层析法提纯后SDS-PAGE检测均显示为单一蛋白条带。ELISA结果显示rLep0697与hCOL3/6、rLep4207与hCOL1/4呈强结合。SPR结果显示rLep0697快速结合hCOL3/6但快速解离( KD值＝5.71×10 -8和5.89×10 -8 mol/L)，rLep4207快速并稳定结合hCOL1/4( KD值＝6.4×10 -9和3.2×10 -9 mol/L)。感染HUVEC和EOMA细胞时，上述vWF-A基因转录和表达水平均显著升高( P<0.05)。 结论:LA_0697和LA_4207基因产物可作为问号钩端螺旋体感染过程中的黏附因子。

目的:观察重组人甲状旁腺素(recombinant human parathyroid hormone，rhPTH)(1-34)联合来氟米特、阿伦磷酸钠治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)合并骨质疏松症(osteoporosis，OS)的效果。方法:选取宿迁市第一人民manbet官网登录 2018年6月至2019年6月收治的94例类RA合并OS患者，随机分为对照组和研究组，每组47例。对照组采取来氟米特＋阿伦磷酸钠治疗，研究组采取rhPTH(1-34)＋来氟米特＋阿伦磷酸钠治疗。对比治疗前后两组患者的RA临床症状、骨密度、抗RA、抗OS的临床疗效，骨代谢情况，以及治疗期间不良反应发生率。结果:治疗前，研究组与对照组患者RA临床症状、骨密度差异均无统计学意义( P>0.05)。治疗后，研究组晨僵时间、关节肿胀数、关节疼痛数均较对照组明显减少，腰椎、髋部骨密度均较对照组明显升高，差异有统计学意义[(35.89±6.17)min比(47.23±6.64)min，(7.49±1.21)个比(10.17±1.67)个，(8.13±1.37)个比(11.28±1.92)个，(0.73±0.14)g/cm 3比(0.67±0.08)g/cm 3，(0.69±0.12)g/cm 3比(0.63±0.11)g/cm 3， t＝ 8.59、8.90、9.16、2.51、2.53， P值均<0.05]。治疗后，研究组患者RA及OS治疗的总有效率均显著高于对照组，差异有统计学意义(85.11%比65.96%，91.49%比72.34%， χ2＝ 4.66、5.82， P值均<0.05)。治疗前，研究组与对照组患者甲状旁腺素(parathyroid hormone，PTH)、骨代谢变化情况比较差异均无统计学意义( P>0.05)。治疗后，研究组患者血清中I型前胶原氨基端前肽(type I procollagen amino terminal-prepeptide，PINP)、骨钙素(bone glaprotein，BGP)含量均显著高于对照组，且研究组血清I型胶原羧基末端交联肽(type Ⅰ collagen carboxy-terminal peptide，I-CTX)显著低于对照组，差异有统计学意义[ng/mL：(50.98±9.64)比(43.57±8.17)、(6.38±1.26)比(5.15±1.07)、(0.55±0.10)比(0.68±0.12)， t＝4.73、5.10、5.71， P值均<0.05]。治疗后，研究组与对照组患者不良反应发生率比较差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:rhPTH(1-34)联合来氟米特、阿伦磷酸钠治疗RA合并OS能明显改善患者RA临床症状、提高骨密度，有效调节患者血清骨代谢标志物水平。

目的 探讨玻璃体内注射原纤维蛋白-2(FBN2)重组蛋白对FBN2缺陷型视网膜病变的影响.方法 取SPF级C57BL/6J小鼠32只,随机分为4组:正常对照组、阴性对照组、FBN2敲减组、FBN2重组蛋白组,每组8只小鼠,取右眼作为实验眼.入组后,正常对照组小鼠不进行干预,阴性对照组小鼠玻璃体内注射3 μL空载体(1 mg·L-1),FBN2敲减组及FBN2重组蛋白组小鼠玻璃体内注射3 μL腺相关病毒(AAV)(1 mg·L-1),4周后FBN2重组蛋白组小鼠玻璃体内注射3 μL FBN2重组蛋白(1 mg·L-1).采用视网膜电图(ERG)视觉电生理仪和光学相干断层扫描(OCT)仪分别检测小鼠视网膜Rod-b、Max-a波振幅和视网膜结构变化;RT-PCR、Western blot检测小鼠视网膜中FBN2、微原纤维相关糖蛋白(MAGP-2)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)mRNA和蛋白表达变化.结果 ERG检测结果显示,与阴性对照组和正常对照组相比,FBN2敲减组和FBN2重组蛋白组小鼠视网膜ERG Rod-b、Max-a波振幅均变小(均为P＜0.05);与FBN2敲减组相比,FBN2重组蛋白组视网膜ERG Rod-b、Max-a波振幅均明显增加(均为P＜0.05).OCT检测结果显示,与FBN2敲减组相比,FBN2重组蛋白组小鼠视网膜色素上皮层组织结构恢复正常,光反射变规则.RT-PCR检测结果显示,与FBN2敲减组相比,FBN2重组蛋白组小鼠视网膜组织FBN2 mRNA表达明显升高,COL1、MAGP-2 mRNA表达均明显降低(均为P＜0.05).Western blot检测结果显示,与FBN2敲减组相比,FBN2重组蛋白组小鼠视网膜组织FBN2蛋白表达明显升高,COL1、MAGP-2蛋白表达均明显降低(均为P＜0.05).结论 玻璃体内注射FBN2重组蛋白可以弥补FBN2缺陷型视网膜病变小鼠FBN2内源性缺失,通过调控COL1、MAGP-2表达可达到治疗疾病的作用.

目的 研究白藜芦醇抑制肾纤维化对单侧输尿管梗阻诱导的肾损伤的减轻作用及相关机制.方法 以Sprague-Dawley(SD)大鼠和成纤维细胞NRK-49F为实验对象,分别进行体内研究和体外验证,体内:SD大鼠行单侧输尿管梗阻诱导建立TIF大鼠模型,将大鼠随机分为4 组(假手术+空白组、假手术+白藜芦醇组、模型+空白组和模型+白藜芦醇组),每组 12 只大鼠.体外:将NRK-49F细胞用重组TGF-β1(5 ng/mL)或白藜芦醇(10 和100 μmol/L)处理后随机分为 4 组(对照组、TGF-β1 组、TGF-β1 +白藜芦醇低剂量组和TGF-β1 +白藜芦醇高剂量组).Masson's染色检测肾脏中总胶原蛋白沉积;免疫组织化学染色检测组织中E-cadherin、GFAP和Ki67 阳性细胞的表达;免疫荧光染色检测细胞中Ki67 阳性细胞的表达;蛋白质印迹检测组织中E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Rac1、c-Myc、Bcl-2、Cyclin D1、α-SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达.结果 与对照组比较,白藜芦醇可以抑制大鼠体内单侧输尿管梗阻(unilater-al ureteral obstruction,UUO)肾脏中总胶原蛋白的过度沉积,下调α-SMA阳性成肌纤维细胞减少波形蛋白、Ⅰ型和Ⅲ型胶原,抑制Rac1、GFAP和N-cadherin的上调以及E-cadherin的下调;与假手术组比较,白藜芦醇可显著降低UUO大鼠中Ki67 阳性细胞比率,并抑制c-Myc,Bcl-2 和cyclin D1 的表达;白藜芦醇抑制体内增殖相关途径Wnt/β-catenin的激活;体外实验表明白藜芦醇治疗可减少成纤维细胞和TECs的增殖,从而抑制TGF-β1 介导的表型转化和ECM积累.结论 白藜芦醇通过抑制Wnt/β-catenin通路的活性,抑制成肌纤维细胞的积累,并减轻了肾小管间质纤维化.

目的 建立以成纤维细胞激活蛋白(FAP)基因启动子为响应元件的新双荧光素酶报告基因系统建的心肌纤维化防治药物筛选方法.方法 体外扩增小鼠FAP基因启动子片段,克隆至psiCHECK2质粒替换HSV-TK启动子,获得新的重组质粒psiCHECK2-FAP.重组质粒经限制性内切核酸酶HindⅢ消化后,进行琼脂糖凝胶电泳鉴定并纯化片段测序验证;将psiCHECK2-FAP瞬时转染至小鼠心肌成纤维细胞(MCF)培养24h后,分别给予转化生长因子β1(TGF-β1)5 μg·L-1,血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)1 μmol·L-1或棕榈酸(PA)100 μmol·L-1 处理 0,12,24 和 48 h,双荧光素酶报告基因实验检测荧光素酶活性.将psiCHECK2-FAP瞬时转染至MCF细胞培养24h后,达格列净(Dapa)1 μmol·L-1预处理1h,再分别添加TGF-β1(5 μg·L-1),Ang Ⅱ(1 μmol·L-1)或PA(100 μmol·L-1)处理24 h,双荧光素酶报告基因实验检测荧光素酶活性,Western印迹法检测MCF细胞中Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和ColⅢ的蛋白表达.结果 HindⅢ将psiCHECK2-FAP切成2个片段且条带大小符合预期,测序结果与理论序列完全一致.与空白对照组相比,TGF-β1,AngⅡ和PA组均可显著增加MCF细胞中ColⅠ和ColⅢ表达(P<0.05,P<0.01);分别与TGF-β1,AngⅡ或PA组相比,Dapa干预后则显著降低ColⅠ和ColⅢ表达(P<0.05,P<0.01);与空白对照组相比,TGF-β1,AngⅡ或PA均可显著增加荧光素酶活性(P<0.05,P<0.01),24 h达最大值;分别与TGF-β1,AngⅡ或PA相比,Dapa干预后则显著降低荧光素酶活性(P<0.05,P<0.01).结论 以FAP基因启动子为响应元件的新双荧光素酶报告基因系统在MCF细胞中对促心肌纤维化因子表现出较好的敏感性,为心肌纤维化防治药物的研发提供策略.