目的:探讨miR-494负调控ROCK1、PTEN进而抑制胰腺细胞凋亡并参与急性胰腺炎发生发展的机制研究。方法:雨蛙素处理大鼠胰腺腺泡AR42J细胞，ELISA法检测细胞培养上清液中淀粉酶、TNF-α、IL-1、IL-6水平以验证急性胰腺炎细胞模型。RT-PCR检测正常AR42J细胞（对照组）、急性胰腺炎细胞模型（模型组）中的miR-494表达水平。流式细胞法检测对照组、转染阴性对照miRNA的急性胰腺炎细胞模型（阴性对照组）以及转染miR-494的急性胰腺炎细胞模型（miR-494转染组）的细胞凋亡情况。Western Blot检测对照组、阴性对照组以及miR-494转染组中促凋亡蛋白ROCK1、PTEN的表达情况。结果:雨蛙素处理AR42J细胞8 h、12 h时的细胞培养上清液中的淀粉酶、TNF-α、IL-1、IL-6水平均显著高于0 h及对照组，差异均有统计学意义（ P<0.05），提示模型构建成功。急性胰腺炎细胞模型构建后8 h、12 h、24 h的miR-494表达水平均显著高于4 h时及对照组，差异均有统计学意义（ P<0.05）。模型组的细胞凋亡比例显著高于对照组，miR-494转染组的细胞凋亡比例显著低于模型组，差异均有统计学意义（ P<0.05）。miR-494转染组ROCK1、PTEN蛋白的表达水平均显著低于模型组和阴性对照组，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:急性胰腺炎发生时过表达的miR-494能够抑制促凋亡蛋白表达，从而抑制胰腺腺泡细胞凋亡并促进急性胰腺炎发生发展。

目的:自动化合成Al 18F－成纤维细胞激活蛋白抑制剂(FAPI)－74，探讨其临床应用价值。 方法:通过商业化合成模块CFN－MPS－100自动化合成Al 18F－FAPI－74，测其产率、放化纯和稳定性。取16只正常昆明小鼠用随机抽签法分成4组，注射Al 18F－FAPI－74后分别在10、30、60和90 min对小鼠实施安乐死并测量药物在体内的生物分布。取5只大鼠胰腺外分泌细胞AR42J BALB/c荷瘤裸鼠，注射Al 18F－FAPI－74后行60 min的microPET/CT动态扫描，观察肿瘤摄取情况。对3名志愿者(男1名，女2名；年龄37、41、43岁)行Al 18F－FAPI－74 PET/CT显像，评价药物的临床应用价值。 结果:自动化合成Al 18F－FAPI－74的时间约35 min，合成产率为(21.34±3.86)%(未衰减校正， n＝5)，放化纯大于99%，37 ℃放置6 h后放化纯仍大于96%。正常小鼠的生物分布和荷瘤裸鼠microPET/CT动态扫描显示，在所有时间点肾脏和膀胱Al 18F－FAPI－74摄取均较高，20 min时肿瘤摄取最高，60 min时肿瘤与肌肉的靶/本底比值最大(3.16±0.01)。志愿者PET/CT显像示，心肌有少量摄取，肝脏、肺等大多数器官为本底摄取；肿瘤持续性高摄取，SUV max最大为17.08。 结论:Al 18F－FAPI－74合成简单、产率高、质量稳定、小鼠和志愿者显像效果良好，是1种符合临床诊断要求的显像剂。

目的:观察氧化苦参碱(OM)对过氧化氢(H 2O 2)处理的大鼠胰腺腺泡AR42J细胞株高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达和释放的影响。 方法:应用MTT法检测不同浓度H 2O 2处理对AR42J细胞生存率的影响。将体外培养的AR42J细胞分为对照组、H 2O 2组、H 2O 2＋OM组。H 2O 2组及H 2O 2＋OM组加入等容积的H 2O 2(终浓度0.16 mmol/L)，对照组加入等容积三蒸水，H 2O 2＋OM组在加入H 2O 2前0.5 h加入OM(终浓度0.5 g/L)，培养24 h后收取细胞及细胞上清液。采用蛋白免疫印迹法检测细胞HMGB1蛋白表达，酶联免疫吸附试验检测细胞上清液HMGB1蛋白水平，免疫荧光法检测HMGB1蛋白在细胞内的定位分布。 结果:H 2O 2组细胞HMGB1蛋白表达量、分泌到细胞上清液中HMGB1蛋白量、细胞质HMGB1蛋白占细胞总HMGB1蛋白的比例均显著高于对照组[1.04±0.04比0.69±0.02，(4.84±0.13)μg/L比(2.68±0.07)μg/L，(35.7±2.5)%比(10.7±1.9)%]，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；应用OM干预后，细胞HMGB1蛋白表达及分泌量、细胞质中HMGB1蛋白占比分别为0.82±0.02、(3.97±0.10)μg/L、(27.3±1.7)%，均显著低于H 2O 2组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。 结论:H 2O 2能够诱导大鼠胰腺腺泡细胞HMGB1的表达和释放，OM干预可减轻H 2O 2致AR42J细胞氧化应激损伤的程度。

目的:探讨 68Ga-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)- D-苯丙氨酸1-酪氨酸3-苏氨酸8-奥曲肽(TATE)注射液放化纯与体内显像效果的关系。 方法:采用高效液相色谱(HPLC)和薄层色谱(TLC)法测定 68Ga-DOTATATE、 68Ga 3+、 68Ga胶体及 68Ga-DOTA- D-苯丙氨酸1-酪氨酸3-苏氨酸8-去苏氨酸-奥曲肽(heptapeptide)，考察标记前体DOTATATE的纯度对标记产物放化纯的影响。建立大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞AR42J荷瘤裸鼠模型，行microPET显像，考察不同放化纯 68Ga-DOTATATE注射液的摄取情况，计算肿瘤组织的靶/非靶(T/NT)比值。采用单因素方差分析和Pearson相关分析数据。 结果:68Ga 3+和 68Ga胶体的含量与标记前体DOTATATE的纯度无明显相关性( r值：0.385、0.497， P值：0.306、0.137)， 68Ga-DOTA-heptapeptide的含量与标记前体中DOTA-heptapeptide的纯度呈正相关( r＝0.957， P<0.001)。纯度分别为90.9%、91.6%、99.2%的DOTATATE，其标记产物 68Ga-DOTATATE注射液的放化纯分别为(87.0±2.3)%、(86.8±0.8)%、(94.0±3.1)%。MicroPET显像示，将放化纯为95.7%、85.8%、84.5%和79.9%的 68Ga-DOTATATE注射液分别注入荷瘤裸鼠体内，肿瘤组织的摄取与放化纯呈正相关( r＝0.828, P<0.001)，其T/NT比值分别为21.25±8.84、8.50±1.51、11.38±1.65和6.01±0.99 ( F＝11.48, P＝0.001)。 结论:68Ga-DOTATATE注射液的放化纯受标记前体纯度及制备工艺的影响，其放化纯与体内显像效果有一定关系。

目的:探讨磷脂酰胆碱特异性磷脂酶D2（phosphatidylcholine specific phospholipase D2，PLD2）通过Nrf2-NFκB途径缓解胰腺细胞损伤过程中泛凋亡的机制研究。方法:将大鼠胰腺AR42J细胞用于实验研究，采用随机数字法分为CON组（常规条件下培养的AR42J细胞）、CER组（建立体外胰腺炎模型，在AR42J细胞中加入10 nM cerulein）、CER+pcDNA组（在体外胰腺炎模型的基础上，建立非靶质粒阴性对照PcDNA）、CER+PLD2-OE组（在体外胰腺炎模型的基础上，建立了PcDNA的PLD2过表达质粒PLD2-OE）。通过RT-qPCR检测PLD2的表达。通过RT-qPCR检测细胞上清液炎症因子的水平。通过蛋白印迹分析Nrf2-NFκB信号通路的表达。通过蛋白印迹分析凋亡相关、焦亡相关和坏死相关蛋白的表达。结果:CER组（0.54±0.01）和CER+pcDNA组（0.62±0.01）PLD2 mRNA表达较CON组（1.02±0.03）降低，CER+PLD2-OE组（1.79±0.12）PLD2 mRNA表达较CON组升高。CER+PLD2-OE组的TNF- α mRNA（2.95±0.21）、IL-6 mRNA（2.35±0.18）和IL-10 mRNA（3.22±0.20）表达较CER + pcDNA组（TNF- α mRNA：4.25±0.25、IL-6 mRNA：3.64±0.21、IL-10 mRNA：3.22±0.20）降低。CER组Nrf2蛋白（0.49±0.01）表达较CON组（1.02±0.01）降低，CER组NFκB蛋白（2.52±0.21）表达较CON组（1.01±0.01）升高。CER+PLD2-OE组Nrf2蛋白（1.24±0.03）表达较CER + pcDNA组（0.50±0.01）升高，CER+PLD2-OE组NFκB蛋白（1.68±0.14）表达较CER + pcDNA组（2.46±0.22）降低。CER组Bax蛋白（1.83±0.14）表达较CON组（1.04±0.02）升高，CER组Bcl-2蛋白（0.31±0.01）表达较CON组（1.02±0.01）降低。CER+PLD2-OE组Bcl-2蛋白（0.75±0.02）表达较CER + pcDNA组（0.30±0.01）升高，CER+PLD2-OE组Bax蛋白（1.42±0.11）表达较CER + pcDNA组（1.85±0.13）降低。CER组Gasdermins蛋白（1.72±0.13）、Caspase-1蛋白（1.88±0.15）和NLRP3蛋白（1.77±0.13）表达较CON组（Gasdermins：1.13±0.04、Caspase-1：1.08±0.02、NLRP3：1.05±0.03）升高，CER+PLD2-OE组Gasdermins蛋白（1.24±0.05）、Caspase-1蛋白（1.16±0.04）和NLRP3蛋白（1.17±0.05）表达较CER+pcDNA组（Gasdermins：1.69±0.12、Caspase-1：1.75±0.13、NLRP3：1.80±0.14）降低。CER组RIPK1/RIPK3蛋白（0.52±0.01）、MLKL蛋白（0.48±0.01）和TNFR1蛋白（0.51±0.01）表达较CON组（RIPK1/RIPK3：1.04±0.02、MLKL：1.03±0.01、TNFR1：1.01±0.01）降低，CER+PLD2-OE RIPK1/RIPK3蛋白（0.65±0.02）、MLKL蛋白（0.54±0.01）和TNFR1蛋白（0.63±0.01）表达较CER+pcDNA组（RIPK1/RIPK3：1.72±0.15、MLKL：1.65±0.13、TNFR1：1.81±0.16）降低。 结论:PLD2在调节泛凋亡过程（凋亡、焦亡和坏死）中发挥关键作用，通过激活Nrf2抗氧化途径和抑制NFκB炎症途径，有效减轻胰腺细胞损伤。

基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶A(AKT)信号通路探讨miR-26a对急性胰腺炎细胞AR42J凋亡与增殖的影响.将细胞分为4组:正常组、模型组(100 nmol/L雨蛙素)、miR-26a NC组(100 nmol/L雨蛙素+miR-26a NC)和 miR-26a inhibitor组(100 nmol/L雨蛙素+miR-26a inhibitor).MTT法检测细胞活力,AnnexinV-PI流式双染法检测细胞凋亡率,ELISA法检测IL-6、TNF-α水平,Western blot检测细胞中Bax、Bcl-2、cleaved caspase 3、PI3K及p-AKT蛋白表达.与正常组比较,模型组及miR-26a NC组细胞活力降低(P＜0.01),细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、IL-6、TNF-α水平、Bax、Cleaved caspase 3、PI3K、p-AKT表达量均升高(P＜0.01),Bcl-2 表达量降低(P＜0.01);与模型组及miR-26a NC组比较,miR-26a inhibitor组细胞活力升高(P＜0.01),细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、IL-6、TNF-α 水平、Bax、Cleaved caspase 3、PI3K、p-AKT表达量均降低(P＜0.01),Bcl-2 表达量升高(P＜0.01).miR-26a通过调控PI3K/AKT信号通路影响雨蛙素诱导的AR42J细胞的增殖与凋亡.

目的 探讨miR-142-3p调控Hmgb1 对大鼠胰腺外分泌细胞系AR42J凋亡的影响.方法 将AR42J细胞分为空白组(blank)、急性胰腺炎模型组(AP,100 nmol/L 雨蛙素作用 24 h),再分别用miR-142-3p mimics、mimics NC、miR-142-3p inhibitor和inhibitor NC转染模型组细胞,记为miR-142-3p mimics组、mimics NC组、miR-142-3p inhibitor组 和inhibitor NC组.用RT-qPCR检测细胞中miR-142-3p表达;Western blot检测HMGB1、caspase-3、Bax、Bcl-2 蛋白表达;Hoechst染色测定细胞凋亡;流式细胞测量术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因实验明确miR-142-3p和Hmgb1 的靶向关系.结果 与空白组相比,AP组中miR-142-3p表达水平显著下调(P＜0.01),HMGB1、caspase-3蛋白表达量上调(P＜0.05),Bax蛋白表达量显著上调(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达量显著降低(P＜0.01),细胞凋亡率显著升高(P＜0.01);与 mimics NC 组相比,miR-142-3p mimics组 miR-142-3p水平显著上调(P＜0.01),HMGB1、caspase-3、Bax蛋白表达量显著下调(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达量上调(P＜0.05),细胞凋亡率显著降低(P＜0.01);与inhibitor NC 组相比,miR-142-3p inhibitor 组miR-142-3p表达水平下调(P＜0.05),HMGB1、caspase-3、Bax 蛋白表达量显著上调(P＜0.01),Bcl-2 蛋白表达量降低(P＜0.05),细胞凋亡率显著升高(P＜0.01),差异均有统计学意义.双荧光素酶报告基因实验显示 Hmgb1 为 miR-142-3p 的靶基因.结论 1)miR-142-3p 在模型组细胞中低表达.2)miR-142-3p可靶向抑制Hmgb1 表达进而抑制AR42J细胞凋亡.

背景与目的:腺泡细胞凋亡在急性胰腺炎(AP)炎症反应和病情进展中发挥重要作用,进一步了解腺泡细胞的凋亡机制及相关通路有助于为AP特异性治疗提供新思路.本研究探讨锌指蛋白基因ZMYM2转录环状核糖核酸(circZMYM2)、微小RNA-29a(miR-29a)与p53上调凋亡调节因子(PUMA)在AP中的表达及其之间的潜在关系.方法:将大鼠胰腺腺泡细胞AR42J用雨蛙素诱导AP体外模型(AP组),或先通过pcDNA3.1-si-ZMYM2转染,敲低circZMYM2后再用雨蛙素诱导AP体外模型(si-circZMYM2组),以无处理的AR42J细胞作为对照组.3 h后分别用ELISA法检测细胞淀粉酶水平、CCK-8法检测细胞活力、流式细胞术与TUNEL法检测细胞凋亡情况、Western blot法检测细胞PUMA蛋白表达、qRT-PCR检测细胞circZMYM2与miR-29a表达.结果:与对照组比较,AP组与si-circZMYM2组淀粉酶水平均明显升高、细胞活力均明显降低、细胞凋亡率或凋亡细胞数均明显增加、PUMA蛋白表达水平均明显升高,但si-circZMYM2组以上指标的变化程度均明显低于AP组(均P<0.05).与对照组比较,circZMYM2表达水平在AP组明显升高,在si-circZMYM2组明显降低,而miR-29a表达水平在AP组明显降低,在si-circZMYM2组明显升高(均P<0.05).结论:circZMYM2在AP的腺泡细胞中表达升高,其可能通过与miR-29a内源性竞争作用,抑制miR-29a的表达,从而上调PUMA表达水平,促进腺泡细胞凋亡和AP进展.

目的 观察长链非编码RNA (lncRNA)-RGD1566401(lncR-RGD1566401)在大鼠胰腺腺泡细胞(AR42J)中表达及对AR42J凋亡的影响.方法 分别用携带有lncR-RGD1566401目的基因的慢病毒(Lenti-lncRNA)和特异性lncR-RGD1566401抑制剂(lncRNA Smart Silencer)转染AR42J细胞株24h,转染空病毒(Lenti-NC)和特异性IncR-RGD1566401阴性抑制剂作为对照;以100 nmol/L雨蛙肽(Caerulin)体外诱导正常培养AR42J及转染后AR42J的凋亡,药物诱导24 h后运用流式细胞技术(FCM)检测各组AR42J细胞凋亡率,使用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测各组lncR-RGD1566401的表达,采用Western blot检测各组凋亡蛋白活性半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和p53表达量变化.结果 雨蛙肽体外诱导AR42J凋亡的凋亡率[(19.34±0.54)％]较对照组[(7.23±0.33)％]明显升高,lncR-RGD1566401表达量较对照组升高(5.43±0.31)倍,活性Caspase-3和p53表达量明显升高;转染携带有IneR-RGD 1566401目的基因的慢病毒组lncR-RGD1566401表达量较空病毒组升高(8.24±0.22)倍,差异有统计学意义(P=0.006);AR42J凋亡率[(38.20±0.37)％]较空病毒组[(22.60±0.96)％]明显升高,差异有统计学意义(P=0.016);活性Caspase-3和p53表达量明显升高;应用特异性lneR-RGD1566401抑制剂组较阴性对照组lncR-RGD1566401表达量降低(0.54±0.14)倍,差异有统计学意义(P =0.003),AR42J凋亡率[(13.60±0.33)％]较阴性对照组[(19.60±0.46)％]明显降低,差异有统计学意义(P=0.012),活性Caspase-3和p53表达量明显降低.结论 lneR-RGD1566401与大鼠AR42J细胞凋亡相关,上调lncR-RGD1566401的表达能够促进大鼠AR42J细胞凋亡.

目的 体外评估大鼠天然全胰腺脱细胞3D支架(3D-APB)促进种植细胞增殖和分化的功能.方法 利用改良灌注技术制备大鼠3D-APB,随即将实验分为4组,评估培养后第3、5、7、10天细胞的增殖活性及细胞分化功能.结果 3D-APB组细胞增殖率高于其他3组(P=0.011),而凋亡率低于其余3组(P=0.017),且差异有统计学意义;3D-APB组胰十二指肠同源结构域转录因子(PDX-1)和胰腺外分泌转录因子(PTF-1)蛋白表达均高于其余3组,且差异有统计学意义(PPDX-1 =0.013,PPTF-1=0.012);3D-APB组PDX-1和PTF-1基因表达含量均高于其余3组,且差异有统计学意义(PPDX-1 =0.013,PPTF-1=0.012).结论 3D-APB更有利于促进细胞增殖及分化,更适合应用于再生医学领域.