目的 采用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)、分子对接和体外细胞实验探讨健脾益气方对肝癌细胞的影响.方法 制备健脾益气方甲醇水溶液并采用UHPLC-MS/MS法分析鉴定中药活性成分.利用Schrodinger软件对鉴定出的所有活性成分及信号通路核心靶点白介素6(IL-6)、糖蛋白130(gp130)、酪氨酸激酶1(JAK1)、酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导蛋白及转录激活子3(STAT3)、程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)和程序性细胞死亡配体1(PD-L1)分别进行分子对接;并用Pymol软件将各靶标蛋白结合能最低的活性成分对接模式进行可视化.采用健脾益气方含药血清干预人肝癌细胞株HepG2进行体外实验验证,将HepG2细胞分为空白组,模型组,健脾益气方低、中、高剂量组(5.25、10.5、21 g/kg),STAT3 抑制组(C188-9,4 μmol/L)和 gp130 抑制组(SC144,10 μmol/L).除空白组外,模型组加入IL-6(50 ng/mL),各给药组加入IL-6和相应药物进行干预.采用CCK-8法、Transwell培养小室法、Annexin V+PI双染色法分别检测各组细胞存活率、侵袭数和凋亡率,ELISA法检测各组细胞培养液中IL-6水平,Western blot法检测各组细胞中gp130、磷酸化JAK1(p-JAK1)、磷酸化JAK2(p-JAK2)、磷酸化STAT3(p-STAT3)、PD-1和PD-L1蛋白表达.结果 UHPLC-MS/MS鉴定出健脾益气方113个活性成分.分子对接结果显示,健脾益气方中有多个活性成分与IL-6、gp130、JAK1、JAK2、STAT3、PD-1和PD-L1靶点蛋白均分别存在分子结合位点且有较低结合能,均小于-5.0 kcal/mol.体外细胞实验显示,与空白组比较,模型组细胞侵袭数升高(P＜0.01),细胞凋亡率则降低(P＜0.01);培养液中 IL-6 水平升高(P＜0.01);gp130、p-JAK1、p-JAK2、p-STAT3、PD-1 和 PD-L1蛋白表达均升高(P＜0.01).与模型组比较,除低剂量健脾益气方含药血清对细胞侵袭数的抑制和对细胞凋亡率的影响无明显变化外(P＞0.05),其它各药物干预组均可抑制模型细胞的增殖与侵袭能力,促进细胞凋亡(P＜0.01);各药物干预组均可降低模型细胞培养液中IL-6水平(P＜0.01);并降低细胞中gp130、p-JAK1、p-JAK2、p-STAT3、PD-1和PD-L1蛋白表达(P＜0.01).结论 健脾益气方可通过多成分调控肝癌细胞IL-6/STAT3炎症信号通路及其介导的PD-L1和固有PD-1的表达,抑制肝癌细胞增殖侵袭,促进细胞凋亡.

表皮生长因子受体(EGFR)基因是非小细胞肺癌患者最常见的驱动基因之一，免疫检查点抑制剂(ICI)在EGFR突变非小细胞肺癌的临床应用中至今颇具争议。程序性死亡配体1(PD-L1)的表达丰度是指导ICI应用的重要预测指标，EGFR突变可能影响肿瘤细胞中PD-L1的表达。近期临床研究指出，ICI单药对EGFR突变的患者缺乏疗效，但ICI联合化疗以及IMpower150试验中提出的四药联合方式在EGRF突变患者中展现出了良好的临床效益，另外ICI与表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)组合模式的安全性还需进一步明确。

目的:探索褪黑素对中波紫外线(UVB)引起人永生化表皮角质形成(HaCaT)细胞黑色素合成的影响及机制，为褪黑素的皮肤保护机制提供理论基础。方法:80 mJ/cm 2 UVB照射10 -5 mol/L褪黑素预处理的HaCaT细胞，照后48和72 h，利用NaOH法检测细胞黑色素水平。照后72 h，利用β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测早衰阳性细胞并分析其比例，蛋白免疫印迹法检测衰老相关蛋白p53和酪氨酸酶(TYR)的表达变化。80 mJ/cm 2 UVB照射分别经毛细血管扩张性共济失调突变激酶/毛细血管扩张性共济失调Rad3相关激酶(ATM/ATR)抑制剂、p53抑制剂和褪黑素预处理的HaCaT细胞，照后72 h检测细胞早衰阳性比例和黑色素水平变化。 结果:褪黑素抑制UVB诱导的黑色素水平增加( t＝56.65、13.39, P<0.05)，同时抑制UVB诱导的TYR表达增加( t＝16.46, P<0.05)；并可缓解UVB诱导的HaCaT细胞早衰( t＝6.37, P<0.05),抑制UVB诱导的p53表达增加( t＝19.08, P<0.05)；ATM/ATR抑制剂、p53抑制剂和褪黑素预处理均可抑制UVB诱导的HaCaT细胞黑色素水平升高( t＝13.88、7.86、8.96, P<0.05)。 结论:褪黑素通过调控p53介导的细胞早衰，抑制UVB诱导的HaCaT细胞黑色素水平增加。

目的:探讨表皮生长因子受体（EGFR）突变晚期肺腺癌患者β-catenin蛋白的表达与EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）疗效和预后的关系。方法:收集解放军联勤保障部队第九○一manbet官网登录 2016年1月至2019年12月收治的Ⅲ B~Ⅳ期接受EGFR-TKI一线治疗的125例肺腺癌患者的临床资料。采用免疫组织化学法检测β-catenin蛋白的表达，扩增阻滞突变系统检测EGFR突变类型，分析β-catenin表达与患者临床病理特征、EGFR-TKI疗效及预后的关系。同时选取EGFR-TKI治疗前和耐药后均有活组织检查的配对标本28对，观察β-catenin的表达变化。 结果:125例EGFR突变的晚期肺腺癌患者中，EGFR 19 del 60例，L858R突变55例，少见敏感突变10例；β-catenin细胞膜表达减少79例（63.2%），细胞质异位表达66例（52.8%），细胞核异位表达28例（22.4%）；β-catenin不同异常表达模式组Napsin A蛋白阳性率均低于相应正常表达组（均 P<0.001），国际肺癌研究协会（IASLC）Ⅲ级患者β-catenin细胞质和细胞核异位表达率均高于Ⅰ~Ⅱ级患者（细胞质异位表达： χ2＝3.99， P＝0.046，细胞核异位表达： χ2＝11.07， P＝0.001）。β-catenin细胞膜表达减少、细胞核异位表达患者客观缓解率（ORR）均低于细胞膜表达正常（ χ2＝4.66， P＝0.031）和细胞核异位表达阴性（ χ2＝10.22， P＝0.001）患者，细胞核异位表达阳性患者疾病控制率（DCR）低于相应正常表达组（ χ2＝10.95， P＝0.001）。β-catenin细胞核和细胞质异位表达阳性患者的无进展生存（PFS）及总生存（OS）均差于相应的细胞质和细胞核异位表达阴性组（均 P<0.05），多因素Cox回归分析结果显示，β-catenin细胞核异位表达是患者PFS、OS独立的危险因素（PFS： HR＝2.088，95% CI 1.331~3.274， P＝0.001；OS： HR＝3.656，95% CI 1.795~7.444， P<0.001）。28例二次活检的组织样本中，同治疗前比较，11例β-catenin细胞膜表达减少（ P＝0.049）。 结论:EGFR敏感突变的晚期肺腺癌中β-catenin的表达可作为预测EGFR-TKI疗效和患者预后的分子标志物。

氨基酸类PET在胶质瘤影像检查中应用广泛，尤其是 18F-酪氨酸( 18F-FET)PET显像在脑胶质瘤的诊疗工作中起着重要作用。该文主要综述近年来有关 18F-FET PET显像在脑胶质瘤诊断及鉴别诊断、指导治疗、评估疗效及预后预测等方面的应用现状。

目的:检测体外培养不同级别早期人胚胎的培养液中氨基酸和肉碱水平，探讨基于质谱的微量分析技术用于评价胚胎体外发育潜能的可行性。方法:从2022年6至12月在临沂市人民manbet官网登录 生殖医学科接受体外受精-胚胎移植治疗的不孕夫妇中，收集女方年龄31.5（26.5，33.25）岁，且获卵数在8~20个的不孕夫妇，从中随机挑选30对不孕夫妇收取其第3天细胞胚的培养液共126份，依据其所对应的胚胎的形态级别分为优（ n=43）、中（ n=49）和差3（ n=34）组。通过液相色谱-质谱联用检测不同培养液中氨基酸和肉碱水平。通过方差分析比较不同组间氨基酸与肉碱水平的差异，通过Pearson相关分析氨基酸与肉碱水平的关联，偏最小二乘法分析氨基酸和肉碱水平与胚胎评估级别的关联。 结果:甲硫氨酸/苯丙氨酸（比值）在优胚、中胚和差胚3组间分别为3.09±1.67、4.00±1.19和4.99±2.04，差异有统计学意义（ F=7.09， P<0.05），优胚与中胚间（ t=-0.91， P<0.05）、优胚与差胚间（ t=-1.91， P<0.05）及中胚与差胚间（ t=-0.99， P<0.05）差异均有统计学意义。不同氨基酸之间，苯丙氨酸与酪氨酸的正相关性最强（ r=0.99， P<0.01）；不同肉碱之间，辛酰肉碱与葵酰肉碱比值（C 8/C 10）与（戊二酰肉碱+3-羟基己酰肉碱）/棕榈酰肉碱比值［（C 5DC+C 6OH）/C 16］的正相关性最强（ r=0.44， P<0.001）；偏最小二乘法拟合模型计算氨基酸/肉碱水平与胚胎级别相关的权重：亮氨酸（异亮氨酸）为2.22，精氨酸为1.99，缬氨酸/苯丙氨酸为1.65，甘氨酸为1.54，酪氨酸为1.21，（戊二酰肉碱+3-羟基己酰肉碱）/辛酰肉碱（C 5DC+C 6OH）/C 8为1.15。 结论:胚胎培养液中亮氨酸、精氨酸、缬氨酸/苯丙氨酸比值、甘氨酸、酪氨酸以及肉碱比值（C 5DC+C 6OH）/C 8与体外培养人早期胚胎级别显著相关。

目的:探讨儿童急性肝衰竭(PALF)的病因、预后及预后影响因素，为临床治疗提供依据。方法:收集2008年5月至2018年5月在湖南省儿童manbet官网登录 住院并确诊为PALF患儿的临床资料，对其病因和预后进行分析，并根据预后分为死亡组和存活组，比较2组生化指标，根据不同资料分别采用 t检验、 Wilcoxon检验和 χ2检验进行统计学分析。 结果:120例PALF患儿中，男68例，女52例；婴儿36例，幼儿34例，学龄前期22例，学龄期28例。病因方面：脓毒症20例(16.7%)、遗传代谢性疾病19例(15.8%)、中毒18例(15.0%)、病毒感染12例(10.0%)、药物6例(5.0%)、胆道息肉1例(0.8%)、肿瘤性疾病1例(0.8%)和病因不明43例(35.9%)。在已知病因中，婴儿以感染和遗传代谢性疾病为主，幼儿以感染和药物/毒物为主，而学龄期和学龄前期以药物/毒物和遗传代谢性疾病为主；PALF患儿病死率为50.0%；EB病毒相关噬血细胞综合征、脓毒症、希特林蛋白缺乏症和酪氨酸血症合并PALF病死率高；与存活组比较，死亡组总胆红素(TB)[159.00(73.05，274.00) μmol/L比62.75(2.65，221.75) μmol/L]、结合胆红素(DB)[83.00(41.43，160.00) μmol/L比38.74(10.98，128.75) μmol/L]、凝血酶原时间(PT)[39.60(24.93，62.60) s比24.65(21.43，29.83) s]、国际标准化比值(INR)[3.40(2.30，6.74)比2.09(1.85，2.84)]、血氨(NH 3)水平[109.50(85.25，149.75) μmol/L比80.00(60.25，102.75) μmol/L]升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；死亡组清蛋白(ALB)[(28.72±5.88) g/L比(33.69±4.96) g/L]、丙氨酸转氨酶(ALT)[586.50(223.25，1 082.00) U/L比1 434.00(615.00，3 334.50) U/L]和天冬氨酸氨基转移酶(AST) [827.50(545.00，2 024.00) U/L比1 663.50(821.00，4 886.75) U/L]水平降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，而血糖和胆固醇水平无明显变化。 结论:PALF病死率高，不同年龄段病因不同，TB、DB、PT、INR、NH 3水平升高及肝性脑病发病率升高，ALB、ALT和AST降低提示预后不良。

目的:观察补体C3基因敲除对四氯化碳(CCl 4)诱导的小鼠肝损伤及肝纤维化的影响。 方法:通过腹腔注射CCl 4对野生小鼠及C3基因敲除鼠进行造模，实验组每周腹腔注射两次2%CCl 4玉米油溶液，每次5 ml/kg，对照组给予相同频率及剂量的玉米油溶液腹腔注射。实验使用随机数字表法将小鼠随机分为4组：野生小鼠对照组(WT-sham)，C3基因敲除鼠对照组(C3 -/--sham)，野生小鼠实验组(WT-CCl 4)，C3基因敲除鼠实验组(C3 -/--CCl 4)。造模4周后处死小鼠，收取其肝组织及血清样本，通过肝功能检测、原位缺口末端标记法(TUNEL)荧光染色、免疫组织化学、定量聚合酶链反应(PCR)等实验方法对样本进行检测，分析各组之间肝损伤、细胞凋亡、肝纤维化、炎症水平等指标的差异。两组之间差异性统计用双尾 t检验进行分析。 结果:WT-CCl 4组血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)显著高于C3 -/--CCl 4组[ALT：(53.5±3.7) U/L比(32.8±3.1) U/L， P<0.01；AST：(170.3±16.2) U/L比(123.3±7.1) U/L， P<0.05]。同时，WT-CCl 4组细胞凋亡水平、氧化应激相关产物髓过氧化物酶(MPO)、3-氯酪氨酸水平显著高于C3 -/--CCl 4组(细胞凋亡：30.0±3.0比17.0±2.6， P<0.05；MPO：3.3±0.2比1.8±0.3， P<0.01；3-氯酪氨酸：3.8±0.8比1.7±0.3， P<0.01)。WT-CCl 4组肝组织天狼星红染色水平、Ⅰ型胶原及平滑肌肌动蛋白生成水平显著高于C3 -/--CCl 4组(天狼星红染色：4.3±0.3比2.0±0.5， P<0.05；Ⅰ型胶原：4.7±0.7比2.3±0.3， P<0.05；平滑肌肌动蛋白：4.6±0.6比2.3±0.3， P<0.05)。WT-CCl 4组肝组织肿瘤坏死因子、白细胞介素(IL)-6及IL-1的RNA表达水平与巨噬细胞浸润水平显著高于C3 -/--CCl 4组(肿瘤坏死因子：4.2±0.6比2.3±0.3， P<0.05；IL-6：3.0±0.3比1.6±0.2， P<0.01；IL-1：3.2±0.1比2.0±0.3， P<0.05；巨噬细胞浸润水平：5.3±0.6比2.6±0.7， P<0.05)。 结论:C3基因敲除可显著减轻CCl 4诱导的小鼠肝损伤及肝纤维化水平。

目的:探讨 90Y-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸-酪氨酸3-奥曲肽（DOTATOC）对人胰腺神经内分泌瘤细胞BON-1的抑制作用。 方法:（1）采用 90Y对DOTATOC进行标记，然后纯化 90Y-DOTATOC；（2）考察 90Y-DOTATOC的体外稳定性；（3）采用噻唑蓝（MTT）法，分别考察 90Y、DOTATOC、 90Y-DOTATOC对人胰腺神经内分泌瘤细胞BON-1和人胰腺胆管瘤细胞PANC-1的抑制作用，并分别计算细胞增殖抑制率。设立阴性对照组、阳性对照组（长春新碱，50 μmol/L）、DOTATOC组（25 μmol/L）、 90Y组（1.8 MBq/ml）、 90Y-DOTATOC高剂量组（ 90Y的放射性浓度为1.8 MBq/ml，DOTATOC的浓度为25 μmol/L）、 90Y-DOTATOC中剂量组（ 90Y的放射性浓度为0.37 MBq/ml，DOTATOC的浓度为25 μmol/L）、 90Y-DOTATOC低剂量组（ 90Y的放射性浓度为0.074 MBq/ml，DOTATOC的浓度为25 μmol/L）。组间比较采用独立样本 t检验。 结果:（1） 90Y标记DOTATOC的标记率为（61.93±3.53）%，放射化学纯度为（98.88±0.38）%，放射性浓度为4.6 MBq/ml，比活度为1.6 GBq/μmol。（2） 90Y-DOTATOC在生理盐水和10%胎牛血清中放置7 d后的放射化学纯度分别为97.73%和97.02%。（3）加药24、48 h后，与阴性对照组相比，DOTATOC组对BON-1细胞的抑制作用均显著增高，且差异有统计学意义（ t=2.654，3.981，均 P<0.05）；加药24、48 h后， 90Y-DOTATOC高、中剂量组对BON-1和PANC-1细胞的抑制作用均优于DOTATOC组，且差异有统计学意义（ t=2.267~3.852，均 P<0.05）；加药24、48 h后， 90Y组对PANC-1和BON-1细胞的抑制作用均明显低于 90Y-DOTATOC高剂量组，且差异有统计学意义（ t=2.698~3.180，均 P<0.05）。 结论:90Y-DOTATOC对BON-1细胞有较强的抑制作用，且与 90Y的活度呈剂量依赖关系。与单独使用DOTATOC或者 90Y对比， 90Y-DOTATOC对BON-1细胞的抑制作用更强。

目的:探讨表皮生长因子受体（EGFR）基因突变与间变性淋巴瘤激酶（ALK）基因融合共存型肺腺癌患者的临床病理特征及治疗与预后。方法:回顾性分析EGFR突变与ALK融合共存的肺腺癌患者的临床病理特征，并对患者进行随访，探讨其临床治疗及预后。结果:（1）2 803例肺腺癌患者的基因检测（ARMS法）结果显示，EGFR突变率为52.98%（1 485/2 803），EML4-ALK突变率为5.82%（163/2 803），其中6例患者EGFR与ALK双突变，占比0.21%。（2）6例EGFR与ALK双突变肺腺癌患者中，男性2例，女性4例，中位年龄55岁，仅1例有吸烟史，临床分期Ⅰ期1例，余5例均为Ⅳ期，EGFR以第19号外显子缺失和第21号外显子L858R突变多见。（3）5例Ⅳ期患者接受第一代EGFR酪氨酸酶抑制剂（TKI）治疗，4例有效，中位疾病无进展生存期为11.5个月，其中2例患者随访期间死亡，总生存期分别为9和12个月。（4）2例患者第一代EGFR-TKI治疗耐药后行二次基因检测示T790M突变，接受第三代EGFR-TKI治疗，分别继续随访16和15个月，疾病无进展。结论:EGFR突变与ALK融合共存的肺腺癌在临床上较少见，多为年轻、女性、不吸烟、临床分期晚的患者，其可能从EGFR-TKI或ALK-TKI靶向治疗中获益，靶向治疗耐药后应行二次基因检测以指导后续治疗。