目的:利用生物信息学技术筛选并分析影响结直肠腺癌患者预后的铁死亡相关基因（FRG）。方法:使用癌症基因组图谱（TCGA）数据库下载RNA测序数据，共545例结直肠腺癌患者临床信息，602例数据集。从FerrDb数据库下载FRG基因集。取FRG基因集与TCGA数据库基因集交集，得到FRG表达数据集。使用R软件筛选结直肠腺癌组织与癌旁组织间差异表达FRG和预后相关基因，获得影响结直肠腺癌预后的FRG。通过在线蛋白互作网络工具分析蛋白之间的互作关系及蛋白质表达的相关性。使用LASSO回归分析构建患者5年总生存率的预后风险模型，计算TCGA数据库509例结直肠腺癌样本的风险值，以中位风险值为临界值，将患者分为高风险组（≥中位风险值）、低风险组（<中位风险值），并绘制生存曲线。绘制依据FRG预后模型的风险值预测TCGA数据库中结直肠腺癌患者5年总生存率时间依赖的受试者工作特征（ROC）曲线，使用Cox比例风险模型进行单因素和多因素生存分析，筛选影响预后的因素。基于基因本体（GO）数据库和京都基因与基因组百科全书（KEGG）数据库对与结直肠腺癌预后相关的FRG进行通路富集分析。结果:数据库中545例患者临床信息，602个数据集中，通过比较发现199个在结直肠腺癌中差异表达的FRG，28个预后相关的FRG，取交集后发现21个影响结直肠腺癌患者预后的FRG。DUOX2、NOX4、NOX1、DDIT3、JDP2、ATP6V1G2、ULK1、ATG3与WIPI1基因间可能有相关性；NOX4、NOX5、PLIN4和ATP6V1G2基因表达呈正相关，ULK1与MAPK1、MYB、FANCD2、ATG3、ATP5MC3基因表达呈负相关。使用LASSO回归分析，最终筛选出15个FRG（ATP5MC3、NOX4、NOX5、ALOX12B、ATG3、WIPI1、MAPK1、MYB、AKR1C1、DDIT3、JDP2、ATP6V1G2、DRD4、SLC2A3、PLIN4），构建风险模型，风险值=NOX4×0.139-ATP5M3×0.108+NOX5×1.486+ALOX12B×0.475-ATG3×0.030-WIPI1×0.170-MAPK1×0.271-MYB×0.063+AKR1C1×0.021+DDIT3×0.186+JDP2×0.292+ATP6V1G2×0.777+ DRD4×0.294+SLC2A3×0.059+PLIN4×0.113。高风险组患者总生存较低风险组差（ P<0.001），低风险组5年总生存率为76.8%，高风险组5年总生存率为48.2%。多因素生存分析显示年龄和风险值是预后的独立影响因素。使用预后相关FRG构建的风险模型能够较好地预测患者5年总生存率（曲线下面积0.728）。高、低风险组患者中的差异表达基因可能与细胞外基质组成和细胞外结构构成、局部黏附等基因通路有关。 结论:依据筛选的FRG构建的预后风险模型可较好评估结直肠腺癌患者预后，这些FRG有望成为结直肠腺癌预后相关新的候选生物标志物。

对1例以糖尿病起病的家族性部分脂肪营养不良综合征4型(FPLD4)患儿临床特征和基因变异特征进行回顾性分析。患儿，男，13岁5个月，糖尿病病程3年余，于2021年11月10日第4次入住苏州大学附属儿童manbet官网登录 ，糖尿病病程中反复发生糖尿病酮症酸中毒逐渐出现脂代谢并发症，基因测序结果显示先证者及其母亲携带基因 PLIN1 c．1325delG(p.G442Afs*99)和 SPINK1 c．194＋2T>C(p.？)双基因杂合变异。 PLIN1为FPLD4的致病基因，c.1325delG变异目前尚未见文献报道。结合患儿临床表现、家族史及基因检测结果，诊断为FPLD4，同时携带基因 SPINK1 c．194＋2T>C(p.？)变异，可能使慢性胰腺炎发生的风险增加。本病例报道丰富了FPLD4的临床特点和基因型数据，基因检测方法的应用使患儿糖尿病分型得到了精准诊断，同时需警惕双基因突变对疾病进展的影响，对制定治疗方案和疾病管理具有重要意义。

目的:探讨雌激素相关受体α（ESRRA）介导的脂噬对鼻咽癌细胞增殖、迁移能力的影响。方法:选取2021年至2023年南通大学附属manbet官网登录 经病理确诊的临床样本16例，其中正常鼻咽黏膜8例，鼻咽癌8例；选择永生化的正常鼻咽上皮细胞株NP69和鼻咽癌细胞C666-1、CNE2、TW03-EBV、TW03。将鼻咽癌C666-1、CNE2细胞株分别分为siR-NC组（转染小干扰RNA阴性对照序列）和siR-ESRRA组（转染针对ESRRA基因的小干扰RNA）。采用蛋白质印迹法和免疫组织化学法检测ESRRA蛋白相对表达水平；EdU实验检测C666-1、CNE2细胞增殖能力；Transwell实验检测C666-1、CNE2细胞迁移能力；实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测ESRRA、围脂滴蛋白3（PLIN3）mRNA的相对表达水平；透射电镜观察C666-1、CNE2细胞脂噬的形成；使用氟硼荧染料（Bodipy）标记脂滴后，通过细胞免疫荧光实验观察脂滴与LC3、PLIN3、LAMP2的共定位情况；双荧光素酶报告基因实验验证ESRRA与PLIN3的靶向关系。结果:鼻咽癌组织中ESRRA蛋白相对表达量（1.15±0.75）高于正常鼻咽黏膜组织（0.32±0.21），差异有统计学意义（ t＝3.02， P＝0.009）。鼻咽癌细胞株C666-1、CNE2、TW03-EBV、TW03中ESRRA蛋白相对表达量分别为1.539±0.044、1.420±0.030、2.867±0.044、1.323±0.022，均高于正常鼻咽上皮细胞NP69（0.094±0.002），差异有统计学意义（ F＝34.08， P<0.001）。EdU实验结果显示，siR-NC组和siR-ESRRA组CNE2细胞中EdU标记阳性细胞比例分别为（70.44±4.06）%和（51.51±0.92）%（ t＝7.88， P＝0.001），C666-1细胞中分别为（62.25±3.89）%和（54.91±0.27）%（ t＝3.26， P＝0.031）。Transwell实验结果显示，CNE2、C666-1细胞中siR-ESRRA组迁移细胞数均少于siR-NC组[CNE2细胞：（181±7）个比（261±21）个；C666-1细胞：（201±16）个比（256±7）个]，差异均有统计学意义（ t＝6.30， P＝0.003； t＝5.43， P＝0.006）。qRT-PCR检测结果显示，siR-ESRRA组PLIN3 mRNA相对表达量较siR-NC组高（CNE2细胞：1.58±0.16比0.83±0.17， t＝5.59， P＝0.005；C666-1细胞：1.37±0.12比1.06±0.06， t＝3.86， P＝0.018）。双荧光素酶报告基因实验结果显示ESRRA与PLIN3有靶向结合关系。透射电镜观察敲低ESRRA后细胞中脂滴含量增加，与自噬小体结合减少；免疫荧光实验结果显示，与siR-NC组比较，siR-ESRRA组LC3和LAMP2与脂滴的共定位减少、PLIN3与脂滴的共定位增加。 结论:ESRRA在鼻咽癌组织和细胞中高表达，作为转录抑制子抑制PLIN3转录，降低脂滴稳定性，介导脂噬，促进鼻咽癌增殖、迁移。

目的 比较高脂饮食、高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)、plin1 敲除(plin1-/-)和 plin1 敲除(plin1-/-)加高脂饮食对小鼠胰岛素抵抗(IR)的影响程度.方法 C57BL/6J 小鼠分为 5 组:普通饮食组(W-N)、高脂饮食组(W-H)、高脂饮食+STZ组(W-S)、plin1-/-普通饮食组(K-N)和 plin1-/-高脂饮食组(K-H),每组 8只,喂养 12 w,测量小鼠体重,空腹血糖(FBG),葡萄糖耐量(GTT)和胰岛素耐量(ITT),并计算GTT和ITT曲线下面积,12 w后收集血清,处死小鼠,取出脂肪组织,检测空腹血清胰岛素水平(FINS)、血清甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA),计算稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、Western blotting检测脂肪组织磷脂酰肌醇 3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、葡萄糖转运体 4(GLUT4)蛋白表达水平.结果 与W-N组比较,其余四组小鼠 FBG、GTT 和 ITT 曲线下面积、HOMA-IR、血清 TG 均明显升高、PI3K、p-AKT 和 GLUT4 蛋白表达均显著下调(P<0.05),W-H组体重显著升高(P<0.05),K-N组体重显著下降(P<0.05),K-N组、K-H组、W-S组FINS显著升高(P<0.05),W-H组FFA显著升高(P<0.05),K-N组FFA显著降低(P<0.05).与K-N组相比,W-H组、K-H组和W-S组小鼠体重显著升高(P<0.05);W-H组小鼠血清FFA显著升高(P<0.05);W-S组小鼠FBG显著升高,PI3K蛋白表达显著下调(P<0.05);K-H组和 W-S组 GTT和 ITT曲线下面积、HOMA-IR、血清 TG、FFA显著升高、p-AKT和GLUT4 蛋白表达显著下调(P<0.05).W-H组小鼠FBG、GTT和ITT曲线下面积、FINS、HOMA-IR、TG、PI3K、p-AKT、GLUT4 蛋白表达无明显变化.结论 plin1-/-诱导小鼠IR程度与高脂饮食喂养的小鼠相当,但低于高脂饮食+STZ诱导的小鼠,高脂饮食喂养的plin1-/-小鼠IR程度大于plin1-/-小鼠.[营养学报,2024,46(2):171-176]

目的 通过诱导人白色前脂肪细胞(human white adipose tissue stromal vascular fraction,hWAT-SVF)分化为成熟脂肪细胞,检测不同分化周期中hWAT-SVF细胞成脂标志物的表达水平,为完善和优化人前脂肪细胞分化模型提供数据支持.方法 将hWAT-SVF细胞培养6天至融合状态,采用3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、地塞米松、胰岛素等诱导细胞分化,在分化的第0、3、6、9、12天收集细胞,观察细胞大小和形态等变化,检测脂滴、中性脂质和甘油三酯(triglyceride,TG)的生成情况,以及脂肪生成相关基因和蛋白[过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)、脂肪酸结合蛋白4(fatty acid binding protein 4,FABP4)和脂滴包被蛋白1(perilipin 1,PLIN1)]等的表达水平.结果 经诱导分化后,hWAT-SVF细胞形态明显变大变圆,脂滴和TG含量显著升高,成脂标志物如PPARγ、FABP4、PLIN1等的表达水平显著上调,表明成功将hWAT-SVF细胞诱导为成熟脂肪细胞.分化第3天PPARγ;以及分化第9天成熟脂肪细胞标志物(FABP4和PLIN1)蛋白表达水平分别显著升高1.8、21、14.3倍.结论 在分化第9天,hWAT-SVF细胞已具备成熟脂肪细胞的特征.本研究成功缩短了人源前脂肪细胞分化模型的构建周期,为研究脂肪生成效应及机制提供了一种有效的细胞模型.

目的 探究创伤性颅脑损伤(TBI)后下丘脑相关交感兴奋与外周脂质代谢改变相关性,为TBI重症营养管理提供依据.方法 将8周龄C57BL/6小鼠随机分为Sham组、TBI-1 d组、TBI-3 d组、TBI-7 d组,每组6只,TBI组进行重物撞击模型,Sham组进行头皮切开缝合处理;于对应时间点处死并留取相应标本.通过油红染色或免疫荧光染色明确各组中棕色脂肪及肝脏脂滴情况;通过Western blot检测肝脏脂噬相关蛋白变化;通过c-Fos免疫荧光染色检测TBI后下丘脑区、中缝核区、延髓头端腹外侧区神经元激活情况;通过分析单细胞数据明确下丘脑区能量代谢相关神经元在TBI后分子水平的变化.结果 (1)TBI后棕色脂肪脂滴大小明显减小,相同视野下TBI组棕色脂肪细胞数量增加.(2)肝脏脂滴包被蛋白-2(PLIN2)荧光染色显示阳性颗粒在TBI后增加,提示肝脏脂质蓄积增多;Western blot结果示TBI后肝脏脂噬相关蛋白增加,提示肝脏脂质利用能力增强.(3)下丘脑区、中缝核区、延髓头端腹外侧区c-Fos荧光染色结果提示TBI后激活神经元增多.(4)单细胞结果提示TBI后下丘脑区神经元激素调节、能量代谢、兴奋性神经元活动等信号出现明显变化.结论 TBI后下丘脑/延髓区神经元激活可能与交感神经高反应性有关,进而促进棕色脂肪及肝脏脂质代谢.

目的 探讨微小RNA-411(miR-411)对滋养层细胞增殖、迁移及侵袭的影响及机制.方法 选取2019年2月-2021年4月于上海市闵行区中心manbet官网登录 诊治的34例子痫前期患者为研究对象,另选取同时期住院正常的22例孕妇为对照组.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测22例正常孕妇胎盘组织和34例子痫前期患者胎盘组织中miR-411和围脂滴蛋白2(PLIN2)基因mRNA表达水平.转染miR-411抑制剂或PLIN2过表达载体至人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo),构建miR-411表达抑制或过表达PLIN2的HTR-8/SVneo细胞.四甲基噻唑蓝染色法(MTT)、克隆形成实验、Transwell及蛋白印迹法分别检测抑制miR-411表达或过表达PLIN2对HTR-8/SVneo细胞存活率、克隆形成、迁移和侵袭及P21、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、E-钙粘附素(E-cadherin)及PLIN2蛋白表达的影响.双荧光素酶报告基因实验验证miR-411与PLIN2调控关系.结果 子痫前期患者胎盘组织中miR-411(0.32±0.03)表达显著低于正常孕妇胎盘组织(1.01±0.10),而PLIN2基因mRNA(2.15± 0.20 vs.0.93±0.09)表达显著升高,差异均有统计学意义(1=37.850、26.841,均P＜0.05).抑制miR-411表达或过表达PLIN2后,HTR-8/SVneo细胞存活率、克隆形成数、迁移和侵袭细胞数及MMP-2蛋白表达降低(均P＜0.05),PLIN2、P21和E-cadherin蛋白表达升高(均P＜0.05).miR-411在HTR-8/SVneo细胞中负调控PLIN2表达.抑制PLIN2表达降低了抑制miR-411表达对HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移及侵袭的影响.结论 抑制miR-411表达可能通过靶向上调PLIN2表达抑制滋养层细胞的增殖、迁移及侵袭.

目的 鉴定脑梗死脂质代谢基因,并探讨活血荣络方的干预作用.方法 采用多芯片联合差异分析(GSE61616、GSE30655),结合Reactome数据库,鉴定出脑梗死脂质代谢基因,并在GSE97537芯片中鉴定并验证脑梗死脂质代谢基因的表达差异;采用Pearson相关性分析GSE61616、GSE30655、GSE97537、GSE137595、GSE22255、GSE163614、GSE78731 数据集中 51 个脑梗死样本mRNA表达相关性;通过STRING数据库、R语言clusterProfiler包对脑梗死脂质代谢基因进行蛋白相互作用及GO、KEGG富集分析.制备脑梗死模型大鼠,并予活血荣络方浸膏11.7 g/kg灌胃给药,连续7 d,观察大鼠神经功能缺损症状、Nissl小体变化及脑梗死脂质代谢关键基因PLA2G4A、SPHK1、PTGS1 mRNA表达.结果 TSPO、CYP1B1、PLIN2、CH25H、PLA2G4A、ANGPTL4、PTGS1、SPHK1、PTGES被鉴定为脑梗死脂质代谢基因,在脑梗死中显著高表达且显著正相关,其中PTGS1、PLA2G4A、SPHK1相互作用关系最强,是脑梗死脂质代谢关键基因;脑梗死脂质代谢基因主要发挥氧化还原酶活性、铁离子结合、血红素结合等分子功能,介导花生四烯酸代谢、磷脂酶D信号通路、VEGF信号通路,参与脂质代谢调控进程、脂肪酸代谢进程、脂肪酸衍生物代谢过程.脑梗死模型大鼠神经功能缺损症状严重(P<0.001),活血荣络方能有效改善模型大鼠神经功能缺损(P<0.001);Nissl染色结果提示,脑梗死后神经元结构异常,数目明显减少(P<0.001),活血荣络方能增加神经元数目(P<0.001),修复神经元结构;RT-qPCR结果提示,脑梗死脂质代谢关键基因在脑梗死中显著高表达(P<0.001),与生物信息学结果一致,活血荣络方能降低脂质代谢关键基因PTGS1、PLA2G4A、SPHK1表达(P<0.001,P<0.01,P<0.05).结论 活血荣络方能下调PTGS1、PLA2G4A、SPHK1表达,发挥氧化还原酶活性、铁离子结合、血红素结合等分子功能,介导花生四烯酸代谢、磷脂酶D信号通路、VEGF信号通路,参与脂质代谢调控进程、脂肪酸代谢进程、脂肪酸衍生物代谢过程,增加Nissl小体数目,改善神经功能缺损症状,发挥神经保护作用.

[目的]探讨脂滴包被蛋白2(PLIN2)增加巨噬细胞内脂质蓄积的机制.[方法]将实验分为氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组、不同PLIN2表达组、不同活性Rab18组,测定高表达和沉默表达PLIN2巨噬细胞中的Rab18和脂酰辅酶A长链合成酶3(ACSL3)蛋白水平,不同活性Rab18的高表达PLIN2巨噬细胞中的PLIN2、Rab18、ACSL3蛋白表达水平.采用Western blot检测蛋白表达水平,采用免疫荧光观察细胞内相关蛋白定位情况,采用油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况.[结果]高表达PLIN2的细胞中Rab18、ACSL3表达水平明显增加(P＜0.05),且PLIN2与Rab18、ACSL3在细胞内存在共定位的现象.转染Rab18显性突变体Q67L质粒(Rab18活性增强)后的PLIN2高表达巨噬细胞中ACSL3表达水平明显升高(P＜0.05),细胞内脂滴的数量也明显增多(P＜0.05).[结论]PLIN2可通过Rab18上调ACSL3表达促进巨噬细胞脂质蓄积.

目的:观察橙皮苷对高脂饮食诱导NAFLD小鼠及其PLIN1基因表达的影响,并探究其可能的作用机制.方法:4周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为4组,高脂饲料喂养诱导小鼠NAFLD模型,成模小鼠分为模型组、橙皮苷低剂量组(200 mg/kg)和橙皮苷高剂量组(400 mg/kg),另设正常对照组.喂养12 w后眼眶取血,颈椎脱臼处死小鼠,计算肝指数,检测小鼠血清TC、TG、LDL、HDL、ALT、AST水平,HE染色观察肝脏组织病理学,RT-PCR法检测肝组织PLIN1 mRNA表达,Western Blot检测肝脏组织PLIN1蛋白及ATGL、HSL等脂代谢相关蛋白表达.结果:与正常对照组比较,模型组肝组织病理学改变明显;肝指数及血清ALT、AST、TC、TG、LDL水平显著升高,HDL水平显著降低;肝组织ATGL、HSL、p-HSL蛋白表达显著降低,HDL水平,PLIN1及蛋白表达显著升高.经橙皮苷干预后,模型小鼠上述指标均显著改善,高剂量的作用更为明显.结论:高脂饮食可诱导小鼠NAFLD和肝脏脂代谢紊乱,橙皮苷能调节肝脏脂质代谢和PLIN1表达,从而改善小鼠NAFLD.