目的 克隆肝型脂肪酸结合蛋白(LFABP)基因,构建其原核表达载体,并进行表达、纯化及鉴定.方法 采用聚合酶链反应(PCR)方法从cDNA中扩增出LFABP基因片段,通过酶切和连接,构建原核表达载体pET-m-LFABP,转化入E.Coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达;应用亲和层析、凝胶过滤层析和 Lipidex1000 凝胶层析分级纯化目的蛋白.圆二色谱分析检测目的蛋白的二级结构和热稳定性.结果 SDS-PAGE 分析表明,表达产物的相对分子质量约为15×103,与理论值相一致;应用亲和层析、凝胶过滤层析和 Lipidex1000 凝胶层析分级纯化目的蛋白,得到纯度较高的蛋白.蛋白的圆二色谱分析表明在大肠杆菌中表达的LFABP蛋白可以形成正确的折叠,热稳定性检测结果表明 LFABP 蛋白在高温下具有较高的稳定性.结论 利用大肠杆菌表达系统,获得了较高纯度的目的蛋白,为进一步研究脂肪酸结合蛋白 LFABP 的生物学特性、参与脂肪酸代谢调控及其机制研究、与药物的相互作用提供重要基础和研究依据,并将为相关疾病的治疗奠定基础.
作者：杨海波；柳静；王莲哲；廖春丽；陈兰英
来源：重庆医学 2010 年 39卷 18期
