目的 构建稳定表达人血管平滑肌大电导钙激活钾通道(BKCa)的293细胞系,并研究其基本电生理学特征和动力学模型.方法 通过脂质体(lipofectamine 2000)转染法转染BKCa表达质粒pcDNA3.1-BKα和(或) pIRES-BKβ1,筛选稳定表达的单克隆细胞系.使用膜片钳多种记录方式研究其基本电生理学特性,同时建立BKCa动力学研究模型.结果 构建稳定转染BKCa通道α和(或)β1亚单位的HEK293细胞系,通过膜片钳能够记录到具有与天然细胞BKCa电生理学特性相似的电流,包括大电导特性[内面向外式构型下单通道电导为(216.38±3.55)pS]、电压依赖性、Ca2+依赖性、钾离子选择性和200 nmol/L IbTX(BKCa特异性阻断剂)阻断;联合表达β1亚单位能够明显增加通道的开放时程.采用inside-out宏观电流记录方式可以记录到明显的尾电流.可以用于分析通道激活、去激活等动力学模型及药物动力学作用机制.结论 成功构建稳定转染BKCa通道α和(或)β1亚单位的HEK293细胞系.膜片钳实验证明具有典型的BKCa电生理学特性,同时建立的细胞系可以很好的用于BKCa通道功能调控研究和动力学参数分析.
作者：谭晓秋；程俊；程秀丽；李畅；毛亮；曾晓荣；曹济民；杨艳
来源：重庆医学 2013 年 42卷 15期
