目的建立简单、可靠的大鼠表皮基底层干细胞体外分离培养方法。方法取新生大鼠背部皮肤，采用胰酶两步消化法获得单细胞悬液，Ⅳ型胶原差速贴壁法富集干细胞，将慢黏附细胞作为对照组细胞，均以角质形成细胞无血清培养基培养。以β1-整合素和角蛋白19（K19）双重荧光染色鉴定细胞表型，克隆形成实验检测细胞体外增殖能力。结果分离培养的细胞为多角形、呈铺路石样排列，倍增时间约为24 h ，细胞形态和生长规律符合基底层干细胞的特征。免疫荧光鉴定显示细胞共表达β1-整合素和K19，基底层干细胞克隆形成能力显著强于对照细胞。结论两步消化联合Ⅳ型胶原差速贴壁法获取基底层干细胞简易可行，培养的细胞活力好、表型可靠。
目的建立简单、可靠的大鼠表皮基底层干细胞体外分离培养方法。方法取新生大鼠背部皮肤，采用胰酶两步消化法获得单细胞悬液，Ⅳ型胶原差速贴壁法富集干细胞，将慢黏附细胞作为对照组细胞，均以角质形成细胞无血清培养基培养。以β1-整合素和角蛋白19（K19）双重荧光染色鉴定细胞表型，克隆形成实验检测细胞体外增殖能力。结果分离培养的细胞为多角形、呈铺路石样排列，倍增时间约为24 h ，细胞形态和生长规律符合基底层干细胞的特征。免疫荧光鉴定显示细胞共表达β1-整合素和K19，基底层干细胞克隆形成能力显著强于对照细胞。结论两步消化联合Ⅳ型胶原差速贴壁法获取基底层干细胞简易可行，培养的细胞活力好、表型可靠。
