目的：探讨细胞周期素依赖性蛋白激酶5（Cdk5）在高糖刺激体外培养小鼠足细胞中的表达及抑制 Cdk5表达对高糖诱导足细胞凋亡的影响。方法（1）体外培养条件性小鼠足细胞，分为正常糖组、甘露醇组、高糖组，高糖组按不同刺激时间分为0、6、12、24、48 h 5组，应用蛋白质印迹（Western blot）法检测足细胞中 Cdk5蛋白表达水平。（2）应用 Cdk5 miRNA 干扰质粒抑制足细胞中 Cdk5基因的表达水平。分别设立：NG 组（正常糖）；HG 组（高糖）；HG ＋ S 组（高糖＋ Scrambled 阴性质粒）；HG ＋ C 组（高糖＋ Cdk5 miRNA 质粒）。以上各组细胞培养48 h 后，应用流式细胞术和末端脱氧核苷酰基转移酶介导性 dUTP 切口末端标记（TUNEL）法检测足细胞凋亡水平，Western blot 法检测凋亡相关蛋白 B 细胞淋巴瘤/白血病-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关 X 蛋白（Bax）和分裂型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cleaved caspase-3）的蛋白表达水平。结果与正常糖组相比，高糖刺激后，足细胞中Cdk5的蛋白表达水平明显增加（P＜0．05）。 Cdk5 miRNA 干扰质粒能显著抑制足细胞中 Cdk5的表达水平。与 HG 组和 HG ＋ S组相比，HG ＋ C 组足细胞凋亡率显著降低（P＜0．05），凋亡相关蛋白 cleaved caspase-3蛋白表达水平和 Bax/Bcl-2蛋白
作者：张悦；张怡；郭庆军；刘巍
来源：重庆医学 2013 年 34期
