目的：构建细胞分裂周期蛋白2（Cdc2）真核表达载体，并在 P16基因缺失的肿瘤细胞 HeLa细胞中表达，利用 LPS诱导细胞凋亡，并探讨 LPS诱导 HeLa细胞凋亡的机制。方法从人 U2OS细胞中提取 RNA，反转录克隆 Cdc2 cDNA片段，利用Gateway技术构建 pDEST27-Cdc2质粒。将 pDEST27-Cdc2质粒瞬时转染人宫颈癌 HeLa细胞，免疫印迹分析 Cdc2的表达情况，并用 LPS刺激，观察其对 LPS引起的细胞凋亡和细胞周期的影响。结果成功构建 pDEST27-Cdc2质粒，质粒酶切及测序结果完全正确。LPS刺激 HeLa细胞24 h后，流式细胞仪检测发现大量细胞凋亡，而转染pDEST27-Cdc2质粒的细胞凋亡率明显降低，提示Cdc2的重要作用。免疫印迹分析研究发现，LPS诱导 HeLa细胞 Cdc2蛋白水平下降，进一步研究发现 LPS诱导 HeLa细胞 G2/M期阻滞，过表达Cdc2可以降低 G2期细胞阻滞的发生。结论 LPS诱导 HeLa细胞凋亡是由于其导致 Cdc2表达下降，细胞分裂停止在 G2/M期，过表达Cdc2可以阻止死亡信号诱导的细胞凋亡。
作者：赵丽君；周辉；赵明
来源：重庆医学 2014 年 16期
