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目的 检验玻璃珠-涡旋振荡改良法提升硅藻DNA提取的效果.方法 以DNeasy PowerSoil Pro试剂盒为对照,另选取2种不同原理的植物DNA提取试剂盒(新型植物基因组DNA提取试剂盒、Plant DNA Isolation试剂盒)和1种血液DNA提取试剂盒(全血基因组DNA提取试剂盒)对同一水样及同一溺死案件肺组织的硅藻DNA进行提取.设计不同大小玻璃珠质量比和涡旋振荡时间的组合,选择加入玻璃珠振荡的最佳DNA提取条件.将常规组与改良组的提取产物直接进行电泳,经硅藻特异性PCR扩增检测,采用qPCR对提取物进行定量,对各组的Ct值进行统计学分析.结果 当涡旋振荡频率为3000 r/min时,DNA提取的最佳组合为涡旋振荡4 min,大小玻璃珠质量比为1:1.以DNeasy PowerSoil Pro试剂盒的Ct值为参照,10 mL水样的Ct值大于0.5 g组织的Ct值.其他3种试剂盒采用玻璃珠-涡旋振荡改良法后,用于植物DNA提取的2种试剂盒Ct值均下降,且改良前后组织的Ct值差异均有统计学意义(P<0.05);全血基因组DNA提取试剂盒可以成功提取硅藻DNA,水样提取效果接近DNeasy PowerSoil Pro试剂盒,改良法用于组织样本后,其Ct值差异有统计学意义(P<0.05);但应用3种试剂盒对水样中硅藻DNA进行提取时,改良前后的Ct值只有新型植物基因组DNA提取试剂盒差异具有统计学意义(P<0.05).结论 玻

作者:蔡杰;王博;胡孙林;曲一泓;宋涛;陈建华;邓建强

来源:法医学杂志 2022 年 38卷 1期

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作者:
蔡杰;王博;胡孙林;曲一泓;宋涛;陈建华;邓建强
来源:
法医学杂志 2022 年 38卷 1期
标签:
法医病理学 溺死 DNA提取 硅藻 玻璃珠-涡旋振荡改良法
目的 检验玻璃珠-涡旋振荡改良法提升硅藻DNA提取的效果.方法 以DNeasy PowerSoil Pro试剂盒为对照,另选取2种不同原理的植物DNA提取试剂盒(新型植物基因组DNA提取试剂盒、Plant DNA Isolation试剂盒)和1种血液DNA提取试剂盒(全血基因组DNA提取试剂盒)对同一水样及同一溺死案件肺组织的硅藻DNA进行提取.设计不同大小玻璃珠质量比和涡旋振荡时间的组合,选择加入玻璃珠振荡的最佳DNA提取条件.将常规组与改良组的提取产物直接进行电泳,经硅藻特异性PCR扩增检测,采用qPCR对提取物进行定量,对各组的Ct值进行统计学分析.结果 当涡旋振荡频率为3000 r/min时,DNA提取的最佳组合为涡旋振荡4 min,大小玻璃珠质量比为1:1.以DNeasy PowerSoil Pro试剂盒的Ct值为参照,10 mL水样的Ct值大于0.5 g组织的Ct值.其他3种试剂盒采用玻璃珠-涡旋振荡改良法后,用于植物DNA提取的2种试剂盒Ct值均下降,且改良前后组织的Ct值差异均有统计学意义(P<0.05);全血基因组DNA提取试剂盒可以成功提取硅藻DNA,水样提取效果接近DNeasy PowerSoil Pro试剂盒,改良法用于组织样本后,其Ct值差异有统计学意义(P<0.05);但应用3种试剂盒对水样中硅藻DNA进行提取时,改良前后的Ct值只有新型植物基因组DNA提取试剂盒差异具有统计学意义(P<0.05).结论 玻