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目的 构建Smad4真核表达质粒并筛选稳定表达野生型Smad4基因的SW480结肠癌细胞系.方法 提取正常人体胎盘组织总RNA,PCR扩增人野生型Smad4基因,通过DNA重组技术将该基因片段重组于peDNA3.1(+)真核表达载体上,构建peDNA3.1(+)-Smad4重组质粒,通过PCR扩增、酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组DNA进行鉴定,脂质体介导方法转染结肠癌细胞系SW480,G418筛选稳定表达株,RT-PCR 方法检测其mRNA表达水平.结果 Smad4基因的PCR电泳结果显示在1700 bp左右有一明显亮带,连接载体后经鉴定证实为人Smad4-cDNA;稳定转染Smad4基因的SW480细胞RT-PCR结果提示Smad4的mRNA表达水平比对照细胞组明显升高.结论 成功扩增野生型Smad4基因,构建Smad4真核表达质粒,并筛选出Smad4基因稳定表达的SW480结肠癌细胞系.
作者：田笑笑；张亚历；付祥胜
来源：广东医学 2009 年 30卷 3期
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