目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在新型过氧化物酶Peroxiredoxin-1(Prx-1)抑制转化生长因子-β1( TGF-β1)诱导的肺成纤维细胞增殖中的作用。方法体外培养肺成纤维细胞,随机分为对照组、TGF-β1组、阴性转染组、Prx-1 siRNA转染组。各组细胞用0.4%血清培养12 h使其同步化。 TGF-β1组、阴性转染组和Prx-1 siRNA转染组均添加5μg/L TGF-β1刺激24 h,阴性转染组和Prx-1 siRNA转染组分别利用脂质体Lipo2000将干扰siRNA和Prx-1 siRNA转染到肺成纤维细胞,培养48 h。 Real-time PCR检测转染后Prx-1 mRNA表达;MTT检测细胞增殖、Western blot检测ERK1/2及Prx-1表达、2,7-二氯荧光素二乙酸( DCFH-DA)检测活性氧( ROS)水平。结果 Prx-1 siRNA转染肺成纤维细胞后,Prx-1 mRNA表达明显降低,最大抑制率为92%。与对照组比较,TGF-β1组的细胞增殖、ROS、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)及Prx-1蛋白的表达水平均明显增加。与TGF-β1组比较,阴性转染组中的上述观察指标无明显变化,但Prx-1 siRNA转染组的细胞增殖、ROS、p-ERK1/2的水平明显上升,而Prx-1蛋白的表达被抑制。结论 TGF-β1能够诱导肺成纤维细胞生成ROS,并由此促进ERK1/2的激活,最终导致细胞增殖
作者:孙影;刘宝欣;魏中秋;冯莉;范玉磊;梁婷婷;杨方
来源:广东医学 2015 年 14期