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目的 探讨端粒结合蛋白CTC1 提高人乳腺癌细胞放射抗性的潜在作用机制.方法 以单纯转染试剂的细胞作为空白对照( Mock组),siNC 转染细胞作为阴性对照(siNC 组),siCTC1#3 转染细胞作为实验组(siCTC1#3 组). MDA-MB-435/MDA-MB-435R 细胞分别以3×105个细胞浓度接种于铺有细胞爬片的6 孔细胞培养皿中,待6 h 左右细胞贴壁后,将细胞分为未处理组( untreated 组)、单纯射线照射组( IR组)、siCTC1#3 干扰组和射线照射联合siCTC1#3 干扰组(IR+siCTC1#3 组).将siRNA (siCTC1#3和siNC)利用脂质体转染至MDA-MB-435/MDA-MB-435R 细胞48 h 后CCK8 试剂盒检测细胞增殖及细胞毒性;台盼蓝染色测定细胞增殖动力学;Real time PCR 检测细胞相对端粒长度;免疫荧光检测细胞的DNA 损伤修复能力及CTC1 蛋白与γH2AX 的共定位情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况;检测细胞Caspase-3的活性以明确细胞早期凋亡事件的触发情况.结果 siCTC1#3组与siNC 组、Mock组增殖能力、相对端粒长度相比,差异有统计学意义(P<0.05);siCTC1#3 组并没有明显引起细胞周期时相的改变(P >0.05);MDA -MB-435R 细胞与MDA-MB-435 细胞相比,对数生长期的增殖速度、相对端粒长度、γH2AX 焦点的数量差异有统计学意义(P<0.05);IR+siCTC1#3组与IR组

作者:刘礼;袁昌劲;余涛;吕秀玮;刘娇萍;赖晓晶;贺文煜

来源:广东医学 2018 年 39卷 8期

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作者:
刘礼;袁昌劲;余涛;吕秀玮;刘娇萍;赖晓晶;贺文煜
来源:
广东医学 2018 年 39卷 8期
标签:
细胞凋亡 端粒 细胞周期 DNA损伤修复
目的 探讨端粒结合蛋白CTC1 提高人乳腺癌细胞放射抗性的潜在作用机制.方法 以单纯转染试剂的细胞作为空白对照( Mock组),siNC 转染细胞作为阴性对照(siNC 组),siCTC1#3 转染细胞作为实验组(siCTC1#3 组). MDA-MB-435/MDA-MB-435R 细胞分别以3×105个细胞浓度接种于铺有细胞爬片的6 孔细胞培养皿中,待6 h 左右细胞贴壁后,将细胞分为未处理组( untreated 组)、单纯射线照射组( IR组)、siCTC1#3 干扰组和射线照射联合siCTC1#3 干扰组(IR+siCTC1#3 组).将siRNA (siCTC1#3和siNC)利用脂质体转染至MDA-MB-435/MDA-MB-435R 细胞48 h 后CCK8 试剂盒检测细胞增殖及细胞毒性;台盼蓝染色测定细胞增殖动力学;Real time PCR 检测细胞相对端粒长度;免疫荧光检测细胞的DNA 损伤修复能力及CTC1 蛋白与γH2AX 的共定位情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况;检测细胞Caspase-3的活性以明确细胞早期凋亡事件的触发情况.结果 siCTC1#3组与siNC 组、Mock组增殖能力、相对端粒长度相比,差异有统计学意义(P<0.05);siCTC1#3 组并没有明显引起细胞周期时相的改变(P >0.05);MDA -MB-435R 细胞与MDA-MB-435 细胞相比,对数生长期的增殖速度、相对端粒长度、γH2AX 焦点的数量差异有统计学意义(P<0.05);IR+siCTC1#3组与IR组