目的：探讨活性氧在转化生长因子-β1（TGF-β1）刺激血管平滑肌细胞（VSMC）产生基质金属蛋白酶9（MMP9）中的作用。方法取一批原代培养大鼠主动脉VSMC分为6组，分别按0、5、0、0．05、0．5、5 mmol／L给予抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）预干预细胞1 h，再用不同浓度TGF-β1（0、0、10、10、10、10 ng／ml）作用24 h，明胶酶谱法检测培养基上清中MMP的活性，裂解细胞蛋白质印迹检测细胞中MMP9的表达。另取一批VSMC原位装载2′，7′-二氯荧光黄双乙酸盐荧光探针，分为两组，A组予TGF-β1（10 ng／ml）干预，B组予NAC（5 mmol／L）预作用1 h后再予10 ng／ml TGF-β1干预，倒置荧光显微镜观察细胞内荧光强度。最后取一批 VSMC 分为6组：（1）对照组；（2）0．1 mmol／L 过氧化氢（H2O2）组；（3）1 mmol／L H2O2组；（4）5 mmol／LNAC组；（5）5 mmol／L NAC＋1 mmol／L H 2O 2组；（6）5 mmol／L NAC＋1 mmol／L H 2O 2＋10 ng／ml TGF-β1组。分别作用24 h后检测培养基上清中蛋白酶的活性和细胞中MMP9的表达。结果 NAC 显著抑制 VSMC 在 TGF-β1作用下MMP9的表达。 TGF-β1作用30 min及60 min后细胞内荧光强度明显增加；而NAC预作用后荧光强度明显减弱。1 mmol／L H2 O2使VSMC表达MMP9显著增高，NAC显著

作者：张浩；王志维；聂荣华

来源：广西医学 2015 年 9期