目的:探究葫芦巴碱通过PTEN诱导性激酶蛋白1(Pink1)/E3 泛素连接酶(Parkin)信号通路介导线粒体自噬对氧-糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的神经元凋亡的影响.方法:原代培养大鼠海马神经元,经下调Pink1 或葫芦巴碱预处理后通过 OGD/R 诱导神经元损伤,实验分组包括对照组、OGD/R组、葫芦巴碱组、pLKO空载体组(转染 pLKO 空载体)、pLKO-Pink1 组(转染连接 Pink1 shRNA 干扰质粒的pLKO载体)、葫芦巴碱+pLKO-Pink1 组.Annexin V-FITC/PI 双染法测定神经元凋亡率;JC-1法测定线粒体膜电位(MMP);Calcein-AM 法测定线粒体膜通透性转换孔(MPTP)开放程度;透射电镜观察自噬小体数量;Western Blot检测线粒体自噬相关蛋白(微管相关蛋白1 轻链3 Ⅱ(LC3 Ⅱ)、Pink1、Parkin)表达.结果:与对照组相比,OGD/R组神经元凋亡率、MPTP 开放程度增加,MMP 下降,自噬小体数量及LC3-Ⅱ、Pink1、Parkin蛋白表达增加(P<0.05);与 OGD/R 组相比,葫芦巴碱组神经元凋亡率、MPTP 开放程度减少,MMP 升高,自噬小体数量及 LC3-Ⅱ、Pink1、Parkin 蛋白表达增加(P<0.05),pLKO-Pink1 组与葫芦巴碱组趋势相反;与葫芦巴碱组相比,葫芦巴碱+pLKO-Pink1 组神经元凋亡率、MPTP 开放程度增加,MMP 下降,自噬小体数量及 LC3-Ⅱ、Pink1、Parkin 蛋白表达减少(P<0.05).

作者：黄琦；翟海程

来源：河北医学 2023 年 29卷 5期