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目的 将一种新颖的核酸扩增技术--环介导等温扩增技术(LAMP)应用于霍乱弧菌毒素基因ctxA的快速检测.方法 针对霍乱弧菌毒素基因ctxA设计6条特异性引物(两条内引物、两条外引物和两条环引物)进行LAMP扩增,对扩增反应进行优化.并考核方法的敏感性和特异性.结果 最佳反应时间为60 min,反应温度为65℃.对8种相关肠道细菌进行LAMP扩增,仅含毒素基因ctxA的霍乱弧菌得到阳性扩增结果,证明引物具有很高的特异性.霍乱弧菌基因组DNA和纯培养物的检测灵敏度分别约为68龟和42cfu/ml.对模拟样品进行直接检测,检测限为72 cfu/g.结论 该方法检测霍乱弧菌毒素基因ctxA特异性强、灵敏度高,并且操作简便、检测成本低,1h即可完成,适合基层检验部门使用.
作者：吴晓芳；徐德顺；钟芬芳
来源：疾病监测 2010 年 25卷 7期
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