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目的 探讨TAR DNA结合蛋白43(TDP-43)对氧糖剥夺(OGD)诱导小鼠HL-1心房肌细胞凋亡的影响及其机制.方法 将体外培养的小鼠HL-1心房肌细胞分为:(1)对照组及不同OGD处理时间(2、4、8、16 h)组,采用CCK-8法检测细胞活力,Western blotting检测TDP-43蛋白表达水平,以此确定OGD诱导时间点用于后续研究;(2)对照组与OGD组,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1染色法检测线粒体膜电位,化学发光法检测三磷酸腺苷(ATP)相对含量,微板法检测丙二醛(MDA)含量,WST-1法检测超氧化物歧化酶(SOD)含量.将转染慢病毒的小鼠HL-1心房肌细胞分为:(1)阴性对照慢病毒干预组(NC-shRNA)、TDP-43 敲低慢病毒干预组(TDP-43-shRNA1、TDP-43-shRNA2、TDP-43-shRNA3),Western blotting检测TDP-43蛋白表达水平,选择慢病毒敲低效率最高的TDP-43-shRNA用于后续试验;(2)NC-shRNA组、TDP-43-shRNA组、OGD+NC-shRNA组、OGD+TDP-43-shRNA组,在常氧条件和OGD条件下,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,MitoTracker染色法检测线粒体形态,JC-1染色法检测线粒体膜电位,化学发光法检测ATP含量,流式细胞术检测活性氧(ROS)荧光强度,微板法检测MDA含量,WST-1法检测SOD含量.结果 CCK-8法检测结果显示,随OGD时间的延长,小鼠HL-1心房肌细胞的活力逐渐下降;Western b

作者:岳娇;龚美婷;徐伍;王鹏;袁木;谭言飞;裴海峰

来源:解放军医学杂志 2023 年 48卷 11期

知识库介绍

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作者:
岳娇;龚美婷;徐伍;王鹏;袁木;谭言飞;裴海峰
来源:
解放军医学杂志 2023 年 48卷 11期
标签:
TAR DNA结合蛋白43 氧糖剥夺 细胞凋亡 氧化应激 TAR DNA-binding protein 43 oxygen-glucose deprivation apoptosis oxidative stress
目的 探讨TAR DNA结合蛋白43(TDP-43)对氧糖剥夺(OGD)诱导小鼠HL-1心房肌细胞凋亡的影响及其机制.方法 将体外培养的小鼠HL-1心房肌细胞分为:(1)对照组及不同OGD处理时间(2、4、8、16 h)组,采用CCK-8法检测细胞活力,Western blotting检测TDP-43蛋白表达水平,以此确定OGD诱导时间点用于后续研究;(2)对照组与OGD组,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1染色法检测线粒体膜电位,化学发光法检测三磷酸腺苷(ATP)相对含量,微板法检测丙二醛(MDA)含量,WST-1法检测超氧化物歧化酶(SOD)含量.将转染慢病毒的小鼠HL-1心房肌细胞分为:(1)阴性对照慢病毒干预组(NC-shRNA)、TDP-43 敲低慢病毒干预组(TDP-43-shRNA1、TDP-43-shRNA2、TDP-43-shRNA3),Western blotting检测TDP-43蛋白表达水平,选择慢病毒敲低效率最高的TDP-43-shRNA用于后续试验;(2)NC-shRNA组、TDP-43-shRNA组、OGD+NC-shRNA组、OGD+TDP-43-shRNA组,在常氧条件和OGD条件下,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,MitoTracker染色法检测线粒体形态,JC-1染色法检测线粒体膜电位,化学发光法检测ATP含量,流式细胞术检测活性氧(ROS)荧光强度,微板法检测MDA含量,WST-1法检测SOD含量.结果 CCK-8法检测结果显示,随OGD时间的延长,小鼠HL-1心房肌细胞的活力逐渐下降;Western b