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目的 利用基因工程技术体外表达梅花鹿基质金属蛋白酶-13(MMP-13)催化域并初步探讨其活性,为进一步研究鹿茸再生和快速增长机制奠定基础.方法 从梅花鹿鹿茸转录组数据中获得cdMMP-13基因序列,通过运用PCR方法获得了编码催化域(cdMMP-13)的cDNA序列,构建重组质粒pET28a-cdMMP-13后,转化大肠杆菌,利用IPTG诱导蛋白表达并纯化蛋白,表达产物经复性后鉴定酶活性.结果 表达产物为21 KDa的融合蛋白且具有明显明胶酶活性.结论 体外表达的具有催化活性的融合蛋白可为研究鹿茸快速生长和再生机制提供材料和基础.

作者:张学亮;张鹏飞;孙天霞;张丽轩;赵雨;曲毅

来源:吉林中医药 2016 年 36卷 10期

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作者:
张学亮;张鹏飞;孙天霞;张丽轩;赵雨;曲毅
来源:
吉林中医药 2016 年 36卷 10期
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梅花鹿 基质金属蛋白酶-13 催化域 明胶酶谱法 sika deer Matrix metalloproteinase-13 catalytic domain zymography
目的 利用基因工程技术体外表达梅花鹿基质金属蛋白酶-13(MMP-13)催化域并初步探讨其活性,为进一步研究鹿茸再生和快速增长机制奠定基础.方法 从梅花鹿鹿茸转录组数据中获得cdMMP-13基因序列,通过运用PCR方法获得了编码催化域(cdMMP-13)的cDNA序列,构建重组质粒pET28a-cdMMP-13后,转化大肠杆菌,利用IPTG诱导蛋白表达并纯化蛋白,表达产物经复性后鉴定酶活性.结果 表达产物为21 KDa的融合蛋白且具有明显明胶酶活性.结论 体外表达的具有催化活性的融合蛋白可为研究鹿茸快速生长和再生机制提供材料和基础.