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目的 探讨微小RNA(miR)-30d-5p对骨髓基质细胞成骨分化和凋亡的影响及其作用机制.方法 将骨髓基质细胞分为miR-30d-5p过表达阴性对照组、miR-30d-5p过表达组、miR-30d-5p抑制阴性对照组和miR-30d-5p抑制组.碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定成骨效果,茜素红染色检测钙结节沉淀情况,TUNEL检测凋亡水平.Real-time PCR、Western blotting检测mRNA和蛋白表达水平,生物信息学分析网站Targetscan 7.1预测miR-30d-5p的潜在结合位点.结果 MiR-30d-5p过表达后,细胞成骨分化能力和矿化能力均降低(P<0.05),而细胞凋亡水平升高(P<0.05).葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和成骨特异性Runt相关转录因子2(RUNX2)蛋白表达均显著降低(P<0.05).但是,miR-30d-5p抑制剂处理细胞后,细胞成骨分化能力和矿化能力均有提升(P<0.05),细胞凋亡水平降低(P<0.05).GRP78和RUNX2蛋白水平均升高(P<0.05).MiR-30d-5p结合位点位于GRP78基因3'UTR的142~148 bp处.结论 MiR-30d-5p通过下调GRP78蛋白的表达抑制骨髓基质细胞成骨分化,并且促进细胞凋亡.

作者:李光;李杰;张平

来源:解剖学报 2023 年 54卷 2期

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作者:
李光;李杰;张平
来源:
解剖学报 2023 年 54卷 2期
标签:
骨形成 成骨分化 矿化 微小RNA-30d-5p 实时定量聚合酶链反应
目的 探讨微小RNA(miR)-30d-5p对骨髓基质细胞成骨分化和凋亡的影响及其作用机制.方法 将骨髓基质细胞分为miR-30d-5p过表达阴性对照组、miR-30d-5p过表达组、miR-30d-5p抑制阴性对照组和miR-30d-5p抑制组.碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定成骨效果,茜素红染色检测钙结节沉淀情况,TUNEL检测凋亡水平.Real-time PCR、Western blotting检测mRNA和蛋白表达水平,生物信息学分析网站Targetscan 7.1预测miR-30d-5p的潜在结合位点.结果 MiR-30d-5p过表达后,细胞成骨分化能力和矿化能力均降低(P<0.05),而细胞凋亡水平升高(P<0.05).葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和成骨特异性Runt相关转录因子2(RUNX2)蛋白表达均显著降低(P<0.05).但是,miR-30d-5p抑制剂处理细胞后,细胞成骨分化能力和矿化能力均有提升(P<0.05),细胞凋亡水平降低(P<0.05).GRP78和RUNX2蛋白水平均升高(P<0.05).MiR-30d-5p结合位点位于GRP78基因3'UTR的142~148 bp处.结论 MiR-30d-5p通过下调GRP78蛋白的表达抑制骨髓基质细胞成骨分化,并且促进细胞凋亡.