目的:构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因为标志基因、人脑源性神经营养因子(hBDNF)基因为目的基因的重组腺病毒Ad5-hBDNF-EGFP,体外转染大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs),探讨转染效率及转染基因的表达情况.方法:构建穿梭质粒pDC316- hBDNF-mCMV- EGFP；利用AdMax包装系统,穿梭质粒与骨架质粒共转染293细胞,同源重组产生复制缺陷型重组腺病毒Ad5-hBDNF- EGFP,经反复感染293细胞扩增病毒.SD大鼠骨髓,体外分离、培养rMSCs,流式细胞仪检测rMSCs表面标记物；不同感染复数( MOI)的重组腺病毒转染第3代rMSCs,检测转染率及hBDNF蛋白的表达变化.结果:PCR、酶切鉴定及测序证实穿梭质粒和重组腺病毒载体成功构建.rMSCs流式细胞仪检测CD34、CD45阴性表达,CD9、CD90阳性表达.腺病毒体外转染rMSCs后荧光显微镜下可见绿色荧光信号表达,免疫印迹法检测出hBDNF蛋白的表达；绿色荧光表达强度、转染率及hBDNF蛋白的表达水平均随着腺病毒MOI的增加而增加,最佳MOI为100.结论:体外成功构建Ad5-hBD-NF-EGFP,并能有效转染rMSCs,成功获取基因工程干细胞,hBDNF及EGFP基因均可在该细胞中得到有效表达.
作者：王长昇；林建华；吴朝阳；张立群
来源：解剖学杂志 2011 年 34卷 5期
