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目的构建抑制血管内皮生长因子(VEGF)活性的小干扰RNA表达载体.方法构建含有PolⅢ H1启动子的pSUPER-H1质粒,化学合成3对编码短发夹RNA的寡核苷酸序列,各64个碱基,退火、克隆到经BglⅡ、HindⅢ酶切处理的pSUPER-H1质粒PolⅢ H1启动子下游,获得重组pSUPER-H1-VEGF质粒,转化感受态大肠杆菌,挑选阳性克隆,抽取重组质粒,EcoRⅠ、HindⅢ双酶切电泳、测序鉴定.结果重组质粒经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切琼脂糖凝胶电泳分析,表明64个碱基的核苷酸序列成功插入到预计位点,经测序鉴定,序列完全一致.结论重组pSUPER-H1-VEGF载体成功构建,开展了质粒介导在体内表达siRNA的方法.
作者：蒋觉安；董万利；胡锦；王元元；惠国桢
来源：江苏医药 2006 年 32卷 4期
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