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本工作采用巴氏毕赤酵母Pichia pastoris表达系统进行了里氏木霉Trichoderma reesei纤维二糖水解酶Ⅱ(CellobiohydrolaseⅡ)的表达.用RT-PCR的方法从经稻草粉诱导的里氏木霉培养物中分离出纤维二糖水解酶Ⅱ的基因,将其插入到巴氏毕赤酵母的表达载体pPICZαA中,并使之处于α-因子信号肽序列的下游,得到重组质粒pPICZαA-cbh2.通过电穿孔的方法用线性化的pPICZαA-cbh2转化巴氏毕赤酵母GS115菌株,经过大量筛选后得到可以高效表达纤维二糖水解酶的毕赤酵母菌株P. pastoris CBHⅡl.在甲醇诱导的条件下培养P.pastoris CBHⅡ1,培养液中的CMC活性可达到3.82U/mL,SDS-PAGE分析结果表明纤维二糖水解酶在P.pastoris CBHⅡ1中的表达量远远高于里氏木霉.对表达产物进行了LC-MS分析,结果表明所表达的蛋白为里氏木霉的纤维二糖水解酶.

作者:张煜;刘刚;余少文;汤新;邢苗

来源:菌物学报 2005 年 24卷 3期

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作者:
张煜;刘刚;余少文;汤新;邢苗
来源:
菌物学报 2005 年 24卷 3期
标签:
纤维素酶 整合表达 液质联用 羧甲基纤维素
本工作采用巴氏毕赤酵母Pichia pastoris表达系统进行了里氏木霉Trichoderma reesei纤维二糖水解酶Ⅱ(CellobiohydrolaseⅡ)的表达.用RT-PCR的方法从经稻草粉诱导的里氏木霉培养物中分离出纤维二糖水解酶Ⅱ的基因,将其插入到巴氏毕赤酵母的表达载体pPICZαA中,并使之处于α-因子信号肽序列的下游,得到重组质粒pPICZαA-cbh2.通过电穿孔的方法用线性化的pPICZαA-cbh2转化巴氏毕赤酵母GS115菌株,经过大量筛选后得到可以高效表达纤维二糖水解酶的毕赤酵母菌株P. pastoris CBHⅡl.在甲醇诱导的条件下培养P.pastoris CBHⅡ1,培养液中的CMC活性可达到3.82U/mL,SDS-PAGE分析结果表明纤维二糖水解酶在P.pastoris CBHⅡ1中的表达量远远高于里氏木霉.对表达产物进行了LC-MS分析,结果表明所表达的蛋白为里氏木霉的纤维二糖水解酶.