Pacifastin蛋白酶抑制剂在昆虫免疫与发育中起着重要作用.为了明确其在寄生蜂中的相关功能,本研究分别克隆获得编码丽蝇蛹集金小蜂Pacifastin蛋白酶抑制剂开放阅读框的cDNA序列nvpp-1和nvpp-2,序列长度分别为723和888 bp,分别编码240和295个氨基酸残基.预测结果表明,nvpp-1和nvpp-2推导氨基酸序列N端均含一个长度为17个氨基酸残基的信号肽序列.序列分析和进化树构建结果表明,NVPP-1和NVPP-2分别含有5个和4个典型的Pacifastin保守结构域,并与疑黑瘤姬蜂Pimpla hypochondriaca毒液蛋白CVP4聚为一类.实时荧光定量RT-PCR结果表明,nvpp-1和nvpp-2于该蜂雌蜂各组织中均发生转录,且在胸、腹部残体(解剖后腹部剩余部分)和毒器官中的转录水平较高;于毒器官中,其在羽化初期(0和1d)转录水平较高,其转录水平显著降低.Western blot结果表明,NVPP-1和NVPP-2均只在毒液中被大量检出,在其他待测组织中均未被检出,而刚羽化时(0 d)其在毒液中含量较低.利用pET-28a(+)载体分别对nvpp-1和nvpp-2进行了原核表达,并对重组表达产物进行纯化.分别测定重组NVPP-1和NVPP-2对4种不同丝氨酸蛋白酶(胰蛋白酶、糜蛋白酶、蛋白酶K和弹性蛋白酶)的抑制效果,结果表明,重组NVPP-1和NVPP-2分别能显著抑制糜蛋白酶和胰蛋白酶活性.同时还分别测
作者：钱岑；方琦；王磊；叶恭银
来源：昆虫学报 2013 年 56卷 8期
