[目的]本研究旨在克隆松毛虫赤眼蜂Trichogramma dendrolimi一氧化氮合酶(NOS)基因,表达其编码蛋白,并探究其在松毛虫赤眼蜂滞育过程中的表达模式,为松毛虫赤眼蜂滞育研究提供新依据.[方法]通过转录组数据分析获得松毛虫赤眼蜂一氧化氮合酶基因TdNOS cDNA序列,使用qPCR方法检测其在松毛虫赤眼蜂不同滞育阶段预蛹和蛹中的表达量.使用RT-PCR方法扩增TdNOS cDNA序列并通过生物信息学方法分析其序列特征.构建TdNOS的原核表达载体,利用大肠杆菌Escherichia coli表达系统表达重组TdNOS蛋白,通过Ni-NTA琼脂糖亲和层析纯化,并用于制备多克隆抗体.利用Westem blot进一步检测TdNOS在松毛虫赤眼蜂不同滞育阶段的表达量.通过质谱鉴定纯化的目标蛋白.[结果]qPCR分析表明,TdNOS在松毛虫赤眼蜂滞育解除后蛹期的相对表达量显著高于其他阶段的.克隆获得松毛虫赤眼蜂TdNOS cDNA序列(GenBank登录号:MN650600),开放阅读框(ORF)序列长1 014 bp,编码337个氨基酸,无信号肽序列,不含跨膜结构,预测有33个丝氨酸磷酸化位点、7个酪氨酸磷酸化位点和10个苏氨酸磷酸化位点.系统发育分析表明,松毛虫赤眼蜂NOS与短管赤眼蜂Z pretiosum NOS亲缘关系最近,形成与其他膜翅目昆虫NOS蛋白分离的独立分支.成功表达纯化了重组蛋白TdNOS并制备了抗
作者：姜雪冰；张雪；杜文梅；邹振；张俊杰
来源：昆虫学报 2020 年 63卷 6期
