目的:构建人Survivin基因的siRNA真核表达载体, 探讨其对骨肉瘤细胞MG63中Survivin基因表达的干涉作用.方法:应用pSilencer 3.0-H1 neo构建Survivin特异性RNA干涉载体,转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞.HE染色观察细胞形态学变化,透射电镜观察细胞超微结构.应用RT-PCR、间接免疫荧光和western blot等方法检测Survivin的mRNA和蛋白水平变化.流式细胞仪检测细胞周期变化.结果:成功构建了Survivin基因siRNA真核表达载体PsvA和PsvB,获得了稳定转染的MG63细胞.与野生型MG63、阴性对照和MG63/PsvA细胞相比,MG63/PsvB细胞增殖反应明显减弱,差异有统计学意义,P＜0.01.MG63/PsvB细胞中Survivin mRNA 和蛋白表达减少.与野生型MG63、阴性对照和MG63/PsvA细胞相比,MG63/PsvB凋亡率增加7倍(P＜0.01).结论:特异性siRNA能够明显抑制Survivin基因在MG63细胞中的表达, 为进一步研究survivn在MG63细胞中的生物学功能和作用机制奠定了基础.
作者：杨彤涛；张志培；李存孝；高杰；张勇；周勇；范清宇；马保安
来源：中华肿瘤防治杂志 2007 年 14卷 10期
