目的:构建含小鼠细胞因子信号抑制因子-1基因(SOCS1)的重组腺病毒载体(AdSF35-SOCS1),探讨其介导SOCS1基因在小鼠树突状细胞中的表达.方法:设计含AgeI和NheI酶切位点的SOCS1基因上下游引物,以质粒pEF-FLAG-1/mSOCS1为模版,通过PCR扩增获得SOCS1全部序列,片段回收后经AgeI和NheI酶切,再定向插入到经AgeI和NheI酶切的质粒pDC316-LacZa中,获得重组穿梭质粒pDC316-SOCS1,经AgeI和NheI酶切、PCR及测序等鉴定后,用脂质体将穿梭质粒pDC316-SOCSl与腺病毒骨架质粒pBHGF35共转染293细胞,经位点特异性重组获得重组腺病毒Ad5F35-SOCS1,行PCR鉴定,经293细胞扩增、纯化制备高滴度病毒液,TCID50法测定病毒滴度.用获得的重组腺病毒感染小鼠树突状细胞,以免疫组化检测SOCS1的表达.结果:成功构建了舍小鼠SOCS1基因的重组腺病毒栽体,病毒感染滴度为1.4×10IU/ml,该载体能有效介导SOCS1基因在小鼠树突状细胞中的表达.结论:重组腺病毒载体能将SOCS1基因转入小鼠树突状细胞并有效表达,为基因转染制备耐受性树突状细胞奠定了基础.
作者：陈晓波；秦杰；焦洋；钟翠平；谭建明
来源：现代生物医学进展 2007 年 7卷 10期
