目的:探讨体外快速大量分离脐带间充质干细胞的新方法.方法:采用复合胶原NB4、dispaseⅡ、透明质酸酶三种酶消化3h,加入PBSA溶液稀释,离心获得脐带间充质干细胞,培养;用流式细胞仪对P3代细胞进行表面标记的鉴定,用化学诱导的方法使第3代细胞向脂肪、骨、软骨细胞分化,2～4周后,分别行oil red、Safranin'O和茜素红染色,倒置显微镜下观察诱导结果.结果:经3种酶消化和PBSA稀释,短时间内从脐带中获得了大量间充质干细胞;伴随着细胞的传代,形态逐渐均一,传至第3代,细胞的形态已基本相似;流式细胞仪鉴定,细胞强表达间充质细胞的特异性标记CD90,CD73,CD105,而不表达造血系或内皮系细胞的标记CD45、CD14、CD11、CD34、CD19,也不表达主要组织相容性抗原HLA-DR;向脂肪细胞诱导后第4周,oil red染色见细胞内大量红染的脂滴;向软骨细胞诱导后第4周,Safranin'O染色见多数切片呈阳性,细胞团块中存在大量软骨特异性的陷窝样结构;向骨细胞诱导后第4周,茜素红染色发现肉眼可见的广泛散在的红色阳性钙结节.结论:本研究所采用的3种酶消化结合PBSA稀释的方法可以快速获得脐带间充质干细胞;
作者：祝加学；沈尊理；秦金保；张涛；孙恒赟；金羽青；周广东
来源：现代生物医学进展 2010 年 10卷 6期
