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目的:构建不同长度包含目的片段的PDGFC 3'UTR双荧光素酶报告基因载体,为进一步研究PDGF-C mRNA的上游miRNA调节做准备.方法:培养人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞,提取腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的基因组DNA,以提取的基因组为模板,通过PCR扩增不同长度的PDGFC 3'UTR片段,经胶回收后,将回收的目的片段插入报告基因载体SV40-pGL3中,再经转化将克隆好的载体转入细菌内扩增(先在固体培养基上扩增为菌落,然后再接种进液体细菌培养管中扩增),扩增细菌后进行质粒提取,并进行菌落PCR及双酶切鉴定,最后送公司进行基因序列检测鉴定.结果:成功构建了不同长度目的片段的PDGFC 3'UTR的双荧光素酶报告基因载体.结论:本实验构建了不同长度的PDGF-C mRNA的3'UTR区的双荧光素酶报告基因载体,为进一步研究PDGF-C mRNA的上游miRNA调节打下了基础.
作者：屈亚琦；罗年安；王涛；贾林涛；董瑞
来源：现代生物医学进展 2015 年 15卷 20期
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