目的:构建含单核苷酸多态性(SNP)位点rs1065024的SOX6基因3'UTR双荧光素酶报告基因载体,并用生物信息学软件预测与rs1065024位点区域相结合的miRNA,为进一步研究此SNP位点的功能及miRNA与SOX6基因3'UTR区之间的关系奠定基础.方法:提取人全血基因组DNA,以基因组DNA为模板,通过PCR扩增含SNP位点在内的SOX6基因3’UTR片段,经过胶回收纯化后,将回收的目的片段插入双荧光素酶报告基因载体pMIR-REPORT中,再经DH5a转化扩增,挑单克隆进行菌落PCR并进行质粒提取,对质粒进行双酶切鉴定,最后进行DNA测序鉴定.针对SNP进行定点突变,构建出野生型和突变型重组质粒,并用生物信息学软件预测出与SNP位点相结合的miRNA.结果:经单菌落质粒测序验证显示带有T碱基的SOX6基因3’UTR重组质粒pMIR-REPORT-3'UTR-T构建成功;经定点突变,成功将pMIR-REPORT-3'UTR-T质粒转变为pMIR-REPORT-3'UTR-C,经比对未引入任何其他突变;生物信息学预测显示,rs1065024位点位于miR-190b、miR-190a-5p、miR-451b、miR-4791与SOX6基因3'UTR的结合区域,其多态的改变可以影响miRNA与mRNA的结合效率.结论:本研究成功构建了含SNP位点rs1065024的pMIR-REPORT-SOX6-3'UTR野生型和突变型重组质粒,为今后SOX6基因3'UTR的SNP位点的功能及miRNA与SOX6基因3'UTR

作者：郭燕；朱东丽；张燕；闫菡；杨铁林

来源：现代生物医学进展 2016 年 16卷 22期