目的:构建能够稳定表达萤火虫荧光素酶报告基因(luc)的乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)食品级表达系统,以便后续研究对目的基因进行示踪.方法:从pGL4.10质粒中PCR扩增萤火虫荧光素酶报告基因,测序,克隆至载体pNZ8149,构建pNZ8149-luc表达质粒;电击转化宿主乳酸乳球菌NZ3900,采用乳糖筛选法获得重组的乳酸乳球菌,Nisin诱导,采用微孔板发光检测仪检测荧光素酶的存在,Western Blot检测目标蛋白luc的表达.结果:PCR扩增的荧光素酶报告基因成功克隆至pNZ8149质粒,并电击转化宿主乳酸乳球菌NZ3900,得到乳酸乳球菌表达系统NZ3900/pNZ8149-luc.Nisin诱导后,检测到荧光素酶随诱导时间的延长活性逐渐增强,时间超过24 h之后荧光素酶活性逐渐下降.Western Blot检测到目标蛋白luc在胞内表达.结论:成功构建了pNZ8149-luc表达载体,并能够在乳酸乳球菌体内稳定表达.
作者：易国辉；姚孟霞；张菁芸；陈锦萍；何小稳；彭江龙
来源：现代生物医学进展 2019 年 19卷 9期
