为了进一步分离人鼻咽组织特异性表达基因和鼻咽癌特异相关基因,采用SMART(switching mechanism at 5′ end of RNA transcript)技术,构建了人胚鼻咽上皮cDNA文库.从原代培养的人胚鼻咽上皮分离总RNA并纯化mRNA,利用经修饰的oligo(dT)引物(含sfiⅠB酶切位点)合成cDNA第一链,同时根据真核生物mRNA5′端帽子结构特点,利用SMART核苷酸(含sfiⅠA酶切位点)作为cDNA第一链在mRNA 5′端延伸出去的模板,进而以此序列为引物利用LD-PCR(long-distance-PCR)合成双链cDNA,双链cDNA经sfiⅠ(ⅠA和ⅠB)酶切和过柱分级分离后,克隆入经sfiⅠ酶切的λTrip1EX2载体后经体外包装而成cDNA文库.结果表明,原始人胚鼻咽上皮cDNA文库获得1.0×106个重组子,重组率达96
为了进一步分离人鼻咽组织特异性表达基因和鼻咽癌特异相关基因,采用SMART(switching mechanism at 5′ end of RNA transcript)技术,构建了人胚鼻咽上皮cDNA文库.从原代培养的人胚鼻咽上皮分离总RNA并纯化mRNA,利用经修饰的oligo(dT)引物(含sfiⅠB酶切位点)合成cDNA第一链,同时根据真核生物mRNA5′端帽子结构特点,利用SMART核苷酸(含sfiⅠA酶切位点)作为cDNA第一链在mRNA 5′端延伸出去的模板,进而以此序列为引物利用LD-PCR(long-distance-PCR)合成双链cDNA,双链cDNA经sfiⅠ(ⅠA和ⅠB)酶切和过柱分级分离后,克隆入经sfiⅠ酶切的λTrip1EX2载体后经体外包装而成cDNA文库.结果表明,原始人胚鼻咽上皮cDNA文库获得1.0×106个重组子,重组率达96
