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血凝素(HA)是决定禽流感病毒的毒力强弱和免疫原性的主要蛋白质根据已发表的H9亚型AIV的HA基因序列,设计合成了l对H9 HA特异引物,以AIV A/Chicken/Henan/1/1999/(H9N2)核酸为模板,通过RT-PCR扩增出l条1.6 kb cDNA片段.将HA基因插入pVAX1中,构建了真核表达质粒pVAX-H9.采用活体电击法免疫3周龄SPF鸡10只,剂量为50μg/只,3周后加强免疫一次,5周后以100倍鸡胚感染剂量(ElD)的HA基因同源病毒对所有鸡进行攻毒.其间每周检测抗体水平变化,6周后以棉拭子进行泄殖腔病毒分离.结果为攻毒后免疫组鸡HI效价为91og2～101og2,对照组为21og2～41og2;免疫组病毒分离数为0/10,对照组为10/10.表明所构建的HA基因表达质粒可作为基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应.
作者：何宏轩；秦曦明；张强哲；汤义；刘丽艳；郑昌学；段明星
来源：生物化学与生物物理进展 2004 年 31卷 2期
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