为探讨核定位信号在热休克蛋白70(HSP70)抑制H2O2所致核仁损伤中的作用,采用分子克隆技术分别构建了4个真核表达载体,pcDNA3.1(-)-HSP70WT(HSp70野生型),pcDNA3.1(-)-HSP70△NLS(核定位信号缺失突变体),pEGFP-N1-HSP70wr,pEGFP-N1-HS70△NLS.向传代培养的C2C12肌源细胞培养液中加入终浓度为1.0 mmol/L的H2O2模拟体外氧化应激.甲苯胺蓝染色细胞核仁发现,正常细胞仅有一个位于中央的、浓染致密的核仁颗粒.过氧化氢处理后3 h,可见明显的核仁分离.热休克反应处理的细胞及转pcDNA3.1(-)-HSP70wr细胞则能明显抑制氧化应激所致的核仁分离.荧光蛋白示踪及核仁蛋白质免疫印迹分析显示,H2O2处理后1 h,HSP70WT由正常时的细胞浆定位转为细胞核及核仁定位,而HSP70△NLS在H2O2处理后仍定位于细胞浆,同时丧失了抑制核仁分离的作用.上述结果提示,野生型HSP70能显著抑制氧化应激所致细胞核仁分离,核定位信号通过介导HSP70向细胞核及核仁移位而决定HSP70对核仁损伤的保护作用.
作者：王慷慨；鄂顺梅；蒋磊；张华莉；刘可；张玲莉；肖献忠
来源：生物化学与生物物理进展 2005 年 32卷 5期
