死亡结构域相关蛋白Daxx可以敏化多种肿瘤细胞的凋亡过程,但对于肝肿瘤细胞株HepG2>的影响未见报道.为了研究Daxx增加肝HepG2>细胞对药物敏感性的影响及机制,为开发药物新的药理作用提供理论依据,分别转染pEGFP-C1和pEGFP-C1-Daxx这两个载体到HepG2>细胞.实验分组如下:(1)正常对照组(未转染细胞组);(2)pEGFP-C1空载体转染组(HepG2>/GFP细胞);(3)pEGFP-C1-Daxx表达载体转染组(HepG2>/GFP-Daxx细胞).筛选稳定细胞株,用逆转录聚合酶链反应检测mRNA的表达;用过氧化氢孵育24 h诱导细胞凋亡,采用MTT法和流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测蛋白质的表达.经G418筛选稳定的细胞运用RT-PCR技术分析其mRNA,结果显示,转染绿色荧光蛋白Daxx表达载体的细胞Daxx的mRNA明显上调;用荧光显微镜观察到Daxx蛋白主要定位于细胞核.用过氧化氢诱导HepG2>细胞凋亡,观察到过氧化氢呈浓度依赖性地抑制HepG2>细胞活性.正常对照细胞、HepG2>/GFP、HepG2> GFP-Daxx 3组细胞的IC50>值分别是0.72、0.76、0.49 mmol/L.并且运用流式细胞仪检测到HepG2>/GFP-Daxx组细胞凋亡率明显高于转染空载体质粒组与未转染组((42.9±8.42)vs(27.3±6.38)or(28.5±4.71)).提示HepG2>/GFP-Daxx细胞对过氧化氢的反应性较未转染细胞和HepG2>/GFP敏感

作者：庹勤慧；熊国祚；朱炳阳；曹建国；廖端芳

来源：生物化学与生物物理进展 2008 年 35卷 11期