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目的:为了研究嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)启动子结构与功能.方法:以pSV-β-galactosidase质粒为骨架,通过定点突变的方法引入一个新的Bst B Ⅰ单酶切位点,构建能在大肠杆菌(Escherichia coli)中正常复制的启动子探针载体.利用PER的方法将A.grttoocifsnd菌cycA2基因上游5'段上游DNA片段克隆到探针载体β-半乳糖苷酶基因上游以替代其原有启动子(gpt启动子),并将重组的质粒转化E.coli DH5α菌株.通过检测宿主细胞的β-半乳糖苷酶活性,来鉴定启动子片段,并分析了启动子探针质粒载体的功能及启动子的强度.结果:pSV-β-galactosidase质粒被正确突变,成功构建了启动子探针载体pSVB.来源于A.ferrooxidans菌的启动子片段可驱动β-半乳糖苷酶基因在E.coli细胞中表达,转化子酶活性约为gpt启动子驱动下活性的70
作者：杨宇；黄芝英；刁梦雪；邱冠周
来源：生物技术 2008 年 18卷 5期
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