目的:制备具有高效价强特异性的抗HIV -1 p15(gag)鸡卵黄抗体(IgY),纯化并分析其免疫学活性.方法:用纯化的HIV -1 p15 (gag)蛋白抗原免疫蛋鸡,用水稀释法对IgY抗体进行粗提取并结合乙醇沉淀和氯化钠盐析法纯化抗体,再通过SDS- PAGE、Western blot、酶联免疫吸附实验(ELISA)检测抗体的纯度、特异性及效价.结果:表达纯化的HIV -1 p15 (gag) - GST融合蛋白分子量为45kDa,用于抗体检测的抗原.用纯化的His - P15蛋白作为免疫原免疫蛋鸡后,获得的卵黄抗体重链、轻链分子量分别为65kDa和25kDa.8倍体积水稀释卵黄,pH值5.1,20％冰乙醇及0.028mol/L盐溶液分离纯化,纯度可达96％,每毫升卵黄液可得到的卵黄抗体为9.8mg.终浓度为18％ ～25％的冰乙醇纯化的抗体浓度高且稳定,同时具有较强的特异性和较高的效价.结论:用HIV - 1p15 (gag)蛋白免疫蛋鸡,可以获得高效价的特异性抗体IgY,为IgY抗体在HIV - 1p15蛋白的研究奠定了实验基础.
作者：赵文思；邹晓华；沈雪莲；王海龙；柳发勇；刘朝奇
来源：生物技术 2012 年 22卷 4期
