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构建载体表达人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（Glypican-3，GPC3）蛋白，用以获得抗GPC3单克隆抗体。用PCR技术扩增GPC3基因，利用酶切位点将该序列插入p3XFLAG-CMV-14载体，构建pCMV-gpc3表达载体。通过脂质体将该载体转染至HEK293细胞中，利用Western blot技术检测最终结果。收集稳定表达的细胞，破碎，通过亲和层析柱，获得纯度较高的GPC3蛋白。成功构建pCMV-gpc3真核表达载体，转染至HEK293细胞后，经G418筛选获得稳定表达的单克隆细胞系；Western blot分析结果表明目的蛋白高效表达。
作者：程华；方向东；崔硕；吴萌；张昭军；李泽夏
来源：生物技术通报 2016 年 32卷 5期
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