利用PCR方法合成EEF1A2的基因全长,经 NotⅠ和NsiⅠ酶切后克隆到慢病毒载体pGLV5-EF1a-EGFP/Puro上.构建的重组质粒pGLV5/EEF1A2经 PCR、酶切及测序鉴定正确后,利用慢病毒表达系统 (pGLV5 Lentiviral Expression Systems),将重组质粒与包装系统质粒 (pVSV-G,pGag/Pol,pRev) 4质粒共转染 293T细胞,收集培养上清并感染人胰腺癌SW1990细胞,经嘌呤霉素筛选出稳定过表达细胞株EEF1A2/SW1990.Real-time PCR和Western blot检测结果显示EEF1A2在EEF1A2/SW1990细胞中表达较原代细胞明显增高(P < 0.05),MTT结果显示EEF1A2/SW1990细胞的增殖能力亦较原代细胞显著增强(P < 0.05).成功构建了EEF1A2基因的慢病毒载体质粒pGLV5-EEF1A2及其慢病毒表达系统,并筛选出稳定过表达EEF1A2的人胰腺癌细胞株EEF1A2/SW1990.
作者：许朝；胡端敏；诸琦
来源：生物学杂志 2013 年 30卷 2期
