目的：构建几种与人类糖尿病相关的人突变型胰岛素原质粒，并在大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1）中进行表达。方法以野生型人胰岛素原质粒基因PCMS-EGFP/HWT为模板，设计并合成引物，利用定点突变技术，PCR生成PCMS-EGFP/H-C(B19)G、H-L(B11)P、H-R(S6)C、H-F(B25)L 4种单点突变质粒，对每个质粒进行序列测定验证定点突变成功，用脂质体2000将上述野生型、4种突变型质粒及空质粒分别转染INS-1细胞，放射免疫法检测各细胞培养液中人胰岛素水平。结果序列测定证实上述质粒定点突变成功, H-C(B19)G、H-L(B11)P、H-R(S6)C 3组突变细胞培养液中胰岛素水平低于野生型和H-F(B25)L组（P＜0.05），与空质粒组差异无统计学意义，且3组彼此间差异无统计学意义；H-F(B25)L组与野生型差异无统计学意义（P＞0.05）。结论成功构建并表达4种突变型人胰岛素原质粒，不同突变型胰岛素原可能通过不同机制导致糖尿病。
作者：张红艳；崔景秋；李宁；刘铭；冯凭
来源：天津医药 2014 年 4期
