目的：探索将测序技术应用于缺失型脊髓性肌萎缩症（SMA）基因诊断的可行性。方法设计2对引物，PCR扩增SMA致病基因运动神经元生存基因（SMN1）与其同源基因SMN2之间5个不同碱基所在区域，第1对引物正向扩增SMN1内含子6至7间长度为501 bp片段，包含4个不同碱基位点g.31957、32006、32154及32269；第2对引物反向扩增SMN1外显子8区域，长度为189 bp，包含1个不同碱基位点g.32734。根据测序图谱区分SMA患者与携带者和（或）正常人。将此方法应用于7个临床疑似SMA家系的诊断，并与聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）法进行比较。结果6例测序图谱显示SMN内含子6至外显子8之间5个SMN1和SMN2差异位点g.31957、32006、32154、32269及32734均只有SMN2特有碱基a、T、g、g和A，患儿父母（携带者）相同位点显示为a/g、T/C、g/a、g/a和A/G。说明患者缺失SMN1基因，缺失范围包括内含子6至外显子8；携带者则既有SMN1基因，又有SMN2基因，与患者能区分开。1例检测结果为a、T、g、g和A/G，说明其缺失范围不含外显子8。测序法与PCR-RFLP方法结果一致。结论测序技术在缺失型SMA患者的基因诊断上优于经典PCR-RFLP法，更方便快捷，结果更明确，建议替代常用的PCR-RFLP法。
作者：孟英韬；舒剑波
来源：天津医药 2014 年 7期
