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目的 探讨趋化因子受体CXCR4及其配体CXCL12(CXCL12/CXCR4)在原发性肝癌侵袭转移中的作用及机制.方法 分别采用Western blot、免疫组化和Real-time PCR等方法检测60例肝癌及对应癌旁组织标本中CXCL12/CXCR4蛋白及mRNA表达水平.常规培养4种肝癌细胞(Huh7、MHCC97h、HepG2、Hep3B)和正常肝细胞(7702),Real-time PCR检测上述细胞中CXCL12、CXCR4 mRNA的表达,筛选合适的实验细胞.将CXCR4干扰质粒(sh-CXCR4)和对应空载体(sh-control)分别转染至MHCC97h构建稳转细胞系.Transwell侵袭实验、细胞划痕实验、MTT实验分别检测2组细胞的侵袭、迁移和增殖能力.取稳定表达的sh-control和sh-CXCR4 MHCC97h细胞,接种至6只裸鼠皮下,观察瘤体生长情况.Western blot检测sh-control和sh-CXCR4 MHCC97h细胞及对应裸鼠移植瘤中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的表达,同时对转染CXCR过表达质粒的MHCC97h中VEGF-C的表达水平进行检测.结果 (1)Western blot、免疫组化和Real-time PCR的结果均证实肝癌组织中CXCL12/CXCR4蛋白及mRNA表达水平均高于癌旁组织.(2)Huh7、MHCC97h、HepG2、Hep3B细胞中CXCL12/CXCR4 mRNA表达水平均高于7702细胞,选取MHCC97h为实验细胞.转染sh-CXCR4的MHCC97h细胞的侵袭、迁移和增殖能力均明显低于sh-control组,

作者:张引;余力信;张发鹏;余晓雯;王文龙;罗志强

来源:天津医药 2018 年 46卷 1期

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作者:
张引;余力信;张发鹏;余晓雯;王文龙;罗志强
来源:
天津医药 2018 年 46卷 1期
标签:
肝肿瘤 趋化因子CXCL12 受体,CXCR4 肿瘤细胞,培养的 细胞增殖 动物实验 血管内皮生长因子受体 liver neoplasms chemokine CXCL12 receptors,CXCR4 tumor cells cultured cell proliferation animal experimentation vascular endothelial growth factor receptor
目的 探讨趋化因子受体CXCR4及其配体CXCL12(CXCL12/CXCR4)在原发性肝癌侵袭转移中的作用及机制.方法 分别采用Western blot、免疫组化和Real-time PCR等方法检测60例肝癌及对应癌旁组织标本中CXCL12/CXCR4蛋白及mRNA表达水平.常规培养4种肝癌细胞(Huh7、MHCC97h、HepG2、Hep3B)和正常肝细胞(7702),Real-time PCR检测上述细胞中CXCL12、CXCR4 mRNA的表达,筛选合适的实验细胞.将CXCR4干扰质粒(sh-CXCR4)和对应空载体(sh-control)分别转染至MHCC97h构建稳转细胞系.Transwell侵袭实验、细胞划痕实验、MTT实验分别检测2组细胞的侵袭、迁移和增殖能力.取稳定表达的sh-control和sh-CXCR4 MHCC97h细胞,接种至6只裸鼠皮下,观察瘤体生长情况.Western blot检测sh-control和sh-CXCR4 MHCC97h细胞及对应裸鼠移植瘤中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的表达,同时对转染CXCR过表达质粒的MHCC97h中VEGF-C的表达水平进行检测.结果 (1)Western blot、免疫组化和Real-time PCR的结果均证实肝癌组织中CXCL12/CXCR4蛋白及mRNA表达水平均高于癌旁组织.(2)Huh7、MHCC97h、HepG2、Hep3B细胞中CXCL12/CXCR4 mRNA表达水平均高于7702细胞,选取MHCC97h为实验细胞.转染sh-CXCR4的MHCC97h细胞的侵袭、迁移和增殖能力均明显低于sh-control组,