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目的 探讨Sirtuin5(SIRT5)对高糖环境下Lovo细胞增殖、凋亡及迁移的影响及可能机制.方法 高糖培养基(葡萄糖含量4500 mg/L)及普通培养基(葡萄糖含量2000 mg/L)培养SIRT5高表达的人结肠癌Lovo细胞,进行慢病毒转染实验,高糖培养基及普通培养基各分为空白对照组(MOCK组,无干预)、阴性对照组(NC组,对照RNAi慢病毒转染)和SIRT5-RNAi组(KD组,SIRT5-RNAi慢病毒转染),用MTT法检测各组细胞1~5 d增殖能力变化,AnnexinⅤ检测各组细胞凋亡率,划痕实验法检测各组细胞迁移率;应用实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞SIRT5、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)及己糖激酶-2(HK2)mRNA的表达变化,Western blot检测各组上述指标的蛋白表达水平.结果 高糖培养基中,KD组与NC组、MOCK组比较,3~5 d时增殖水平降低,凋亡率增加,而24 h迁移率降低(P<0.05),且SIRT5、mTOR、HIF-1α、PKM2及HK2 mRNA及蛋白的相对表达水平均明显降低(P<0.05).普通培养基中,KD组与NC及MOCK组比较,1~4 d时增殖水平差异无统计学意义,5 d时增殖水平降低(P<0.05),24 h凋亡率差异无统计学意义.结论 高糖环境下,SIRT5可能通过影响糖代谢关键酶HK2及mTOR/HIF-1α/PKM2信号通路调控糖酵解,从而促进结肠癌的发生

作者:贺帅;岳淑芬;周蕾;齐琦

来源:天津医药 2020 年 48卷 9期

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作者:
贺帅;岳淑芬;周蕾;齐琦
来源:
天津医药 2020 年 48卷 9期
标签:
结肠肿瘤 细胞系,肿瘤 抗衰老酶 缺氧诱导因子1,α亚基 丙酮酸激酶 己糖激酶 高糖 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 sirtuin5
目的 探讨Sirtuin5(SIRT5)对高糖环境下Lovo细胞增殖、凋亡及迁移的影响及可能机制.方法 高糖培养基(葡萄糖含量4500 mg/L)及普通培养基(葡萄糖含量2000 mg/L)培养SIRT5高表达的人结肠癌Lovo细胞,进行慢病毒转染实验,高糖培养基及普通培养基各分为空白对照组(MOCK组,无干预)、阴性对照组(NC组,对照RNAi慢病毒转染)和SIRT5-RNAi组(KD组,SIRT5-RNAi慢病毒转染),用MTT法检测各组细胞1~5 d增殖能力变化,AnnexinⅤ检测各组细胞凋亡率,划痕实验法检测各组细胞迁移率;应用实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞SIRT5、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)及己糖激酶-2(HK2)mRNA的表达变化,Western blot检测各组上述指标的蛋白表达水平.结果 高糖培养基中,KD组与NC组、MOCK组比较,3~5 d时增殖水平降低,凋亡率增加,而24 h迁移率降低(P<0.05),且SIRT5、mTOR、HIF-1α、PKM2及HK2 mRNA及蛋白的相对表达水平均明显降低(P<0.05).普通培养基中,KD组与NC及MOCK组比较,1~4 d时增殖水平差异无统计学意义,5 d时增殖水平降低(P<0.05),24 h凋亡率差异无统计学意义.结论 高糖环境下,SIRT5可能通过影响糖代谢关键酶HK2及mTOR/HIF-1α/PKM2信号通路调控糖酵解,从而促进结肠癌的发生